• Forum - ADN, Site, Restriction, Digestion

[Biochimie] enzyme de digestion-restriction

On parle d'enzyme de restriction. Elle reconnaît spécifiquement des séquences d'ADN appelés site de restriction et induit une digestion de l'ADN.  [...] En PFGE, on peut parler d'enzyme de macro-restriction puisqu'elle génère des macro-fragments d'ADN (de + de 50 kb) résolus par électrophorèse en champs pulsé.  [...]

microbiologie - CARTE DE RESTRICTION

Voilà, je n'ai jamais suivi de cours de bio depuis le lycée, et mon prof me demande de faire une carte de restriction sans m'expliquer ce qu'était le phénomène. une digestion de restriction, un adn plasmidique circulaire, bref j'ai dû mal à me représenter de quoi il s'agit.  [...] digestion de restriction. certaines protéines sont capables de couper l'ADN à des endroits bien précis (par exemple. gaa. ttc). Ce sont les enzymes de restriction. Dès que l'enzyme trouve son site, elle coupe l'ADN comme tu couperais un bout de ficelle avec un ciseau.  [...]

[Génétique] taille moyenne fragments de restriction

Je bloque sur une question où l'on me demande de calculer la taille moyenne des fragments de restriction après digestion par ecoR1 (site reconnaissance. GAATTC) de l'adn humain.  [...] Apres ça il ne te restes plus qu'a calculer la fréquence d'apparition de ton site EcoRI et de multiplier par la taille du génome.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

pour le protocole de clonage, la première étape est la création d'une banque d'adn (extraction adn, digestion par une enzyme de restriction puis ligation de ces fragments dans des plasmides portant les sites de restrictions de l'enzyme restriction choisie).  [...] Une derniere question piwi je ne comprends pas ce que veut dire. Digestion de restriction de la PCR et du fragment dans l'étape 6.  [...]

[Biologie Moléculaire] TP digestion ADN par enzymes de restriction par électrophorèse sur gel d'agarose

Bonjour, merci. Oui bien entendu je sais ce qu'est une enzyme de restriction. Une enzyme de restriction reconnait un site de restriction généralement palindromique sur l'ADN une fois reconnu elle clive. Alors j'utilise un ADN de phage lambda c'est de l'ADN circulaire il me semble mais qu'elle est le rapport avec la migration et oui je sais aussi c'est quoi l'électrophorèse sur gel d'agarose c'est la migration de fragments d'ADN ( dans mon cas) du fait qu'on exerce un champs électrique l'ADN étant chargé négativement va migré du coté positive au niveau de la matrice d'agarose les fragments les plus courts migreront plus vite et plus rapidement mais sa m'aide pas pour l'analyse car on a des bandes linéaire et non pas circulaire.  [...] Tu digères ton ADN de phage, tu te retrouves donc avec plusieurs morceaux d'ADN de différentes tailles que tu sépares sur un gel d'agarose pour voir leurs tailles (en comparant avec le marqueur de poids moléculaire qui sert d'étalon) et savoir combien de sites de restriction il y a dans ton ADN de phage.  [...]

[Biochimie] Analyse résultats PCR - TPE

3. La mutation génère/détruit un site de restriction. Vous le voyez en procédant à une digestion de restriction effectuée sur un produit PCR bornant le site de mutation.  [...] 4. L'extrémité 3' d'une amorce doit absolument être complémentaire du fragment à amplifier faute de quoi l'ADN polymérase ne peut pas amorce la réplication. Vous ciblez pile l'extrémité 3' de votre amorce sur le site muté. La PCR ne fonctionne pas contrairement à la population générale.  [...]

[Génétique] hybridation adn/adn : technique de southern blot

j'ai réalisé récemment une hybridation adn/adn par la technique de Southern blot. Lors de la digestion enzymatique, il à été utilisé de l'ADN provenant de phage lambda. Les différents tubes comportaient également de l'eau stérile, du tampon 10X, Ainsi que les enzymes de restriction, (EcoRI et/ou HindIII selon le tube).  [...] Donc dans ce cas, le fragment d'ADN visible au puit 4 à déjà été digéré. puisqu'en regardant ma carte de restriction, je constate que EcoRI permet d'obtenir un fragment de 21 226 pb. Pourtant mon puit 4 ne contient pas d'enzyme, donc pas de digestion possible.  [...]

exercice de génomique assez complexe..

Soit une séquence d'ADN (bicaténaire) constituée de TCTAGA, site de restriction reconnu par l' endonucléase de restriction XbaI.  [...] Puis ensuite voir si tu peux mettre ta séquence d'ADN digéré, c'est à dire sans les morceaux sur les côtés, après (ou avant, suivant comment on se place) les /.  [...]

[Biochimie] RFLP, SNP et compagnie !

alors déjà, les SNP sont des RFLP. Ce sont des polymorphismes (une mutation d'un ou de plusieurs nucléotides en gros) non pathologiques. Ils se situent dans la plus part des cas dans un intron.   [...] Si la mutation présente dans la maladie modifie également un fragment de restriction, en analysant les différents fragments obtenus après digestion par l'enzyme de restriction, vous pouvez d'une part savoir si l'individu a son site de restriction muté et d'autre part si il est hétérozygote ou homozygote pour le gène en question.  [...]

électrophorèse sur gel d'agarose

J'ai eu les résultats de la digestion et j'observe dans chaque cas 2 bandes. pour le plasmide non digéré j'ai une bande claire puis une bande foncée. et pour le plasmide digéré, j'ai d'abord la bande foncée puis la bande claire.  [...] Pour le BET c'est bien le cas, je suppose que c'est pareil pour les autres intercalants de l'ADN. Par contre cette relation marche t'elle que pour les fragments linéaires Une bande correspondant a un plasmide surenroulé ne devrait-elle pas être moins intense du au fait que certaines bases de l'ADN soit inaccessible du a la topologie de l'ADN ou alors est-ce négligeable.  [...]