• Forum - ADN, Séquence, Restriction

[Biologie Moléculaire] carte de restriction?

C'est la position des sites de restriction d'une enzyme sur la séquence d'ADN digéré.  [...] Sara789, aurais-tu oublié les règles basiques de politesse.   [...]

sépartion des gène de l'ADN

j'ai vu dans un reportage que pour produire cetaine protéine on replacais les gène de l'adn par d'autre pour qu'ils effectuent l'action recherché,  [...] j'ai l'impression que ton repportage a beaucoup simplifié le problème. Mais sache que pour couper l'ADN, on utilise des enzymes (au fait ça prend un Z et un Y ) dites de restriction. Mais il en existe un nombre impressionnant. Chacune est capable de couper l'ADN quand elle rencontre une certaine séquence de bases.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

la séquence de ton ADN doit être coupée des deux bords avec la même enzyme que tu utilise pour linéariser le vecteur..de plus, ton site de restriction doit être localisé sur un marqueur de séléction.  [...] (pour verifier cela, j'ai utulise NEBcutter v2.0 (cliquer sur le mot pour aller au logiciel, pour proceder, j'ai copier ma sequence d'adn la-bas ensuite j'ai cliquer sur submit et j'ai obtenue tout les sites de restriction)).  [...]

ADN de séquence inconnue, choix des enzymes de restriction.

Je pense à des procédés comme la I-PCR, ou à l'utilisation de marqueurs radioactifs pour détecter l'emplacement des fameux sites de restriction mais tout cela reste assez vague.s.  [...] En effet j'ai oublié de le préciser, d'après mon enseignant, il s'agit la d'un produit issue d'une migration électrophortique d'origine inconnue (la belle affaire). Il a illustré sa question par l'exemple d'un chercheur ayant découvert un nouveau gène (produit d'une électrophorèse) à nombre x paires de bases, de plus il à exclu d'emblée la présence de quelconque correspondance dans les bases de données génomiques (encore mieux).   [...]

[Biotechnologie] Enzyme de restriction

donc apres analyse par electrophorese tu n'aura plus des bout de meme taille que pour un adn normal. se sera donc la preuve qu'il ya eu une mutation tu comprend.  [...] un palindrome (sequence d'adn invariante reconnu par l'enzyme de restriction).  [...]

soutern, PCR, banque genomique

UNe banque génomique, c'est une collection de vecteur ayant chacun intégré un morceau d'ADN génomique, par exemple après digestion à completion de ce dernier. Le passage en vecteur permet d'amplifier ce morceau (notamment quand ne connait pas la séquence, alors qu'on amplifie en PCR quand on la connait en général) et donc de le stocker (conservation), et de l'analyser (restriction, séquencage depuis une amorce située sur le vecteur).  [...] La PCR ne peut amplifier que quelques centaines de paires de bases. Pour une séquence plus importante, il faut l'amplifier en l'incluant dans un vecteur qui pourra être cloné en même temps que l'hôte qui le recevra. Si la séquence est vraiment trop grosse, il faut la diviser et inclure les portions dans des vecteurs pour constituer une banque.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Faire une électrophorèse seule ne permet pas de différencier un ADN A d'un ADN B (même si c'est l'ADN humain et l'ADN d'une fougère...). il faut soit digérer l'ADN à l'aide d'enzyme de restriction (comme l'a dit noir-ecaille), soit utilisé la PCR pour amplifier certaine séquence (comme l'a dit TanguyE).  [...] Généralement, lorsque l'on utilise une enzyme de restriction commune, on ne parle pas d'où elle coupe (car elle peut aussi des fois ce tromper) mais à quelle fréquences elle coupe en moyenne. Tout les 200pb Ou toute les 4000pb C'est surtout ceci qui est regardé.  [...]

[Biologie Moléculaire] utilisation de serial cloner

Alors j'explique mon problème, je dois faire un clonage avec des sticky ends et quand j'essaye de faire une construction avec serial cloner je n'arrive pas à sélectionner une enzyme pour qu'il coupe lui même au niveau du site de restriction. Est-ce tout simplement possible Si non comment faites vous.  [...] J'ai aussi une autre question, toujours sur Serial Cloner, est-il possible de couper par une enzyme de restriction et avoir la séquence correspondante à l'ADN linéaire après la coupure.  [...]

[Génétique] Principe de la technique RFLP

SVP si quelqu'un pourrai m'expliquer le principe de la technique RFLP ( le polymorphisme de longueur des fragments de restriction de l'ADN ), et comment il sert à l'etablissement des caryotypes ainsi que la detection de certaines maladies génétiques.  [...] Grace a un ordinateur qui pouvait reperer les possibilité d'abolition ou de creation de site de restriction sur une sequence d'ADN qu'on a rentre au prealable on pouvait en quelques sorte triché.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Je ne comprend pas vraiment...une sonde est complémentaire et antiparallèle de la séquence à étudier donc comment rajouter une séquence à l'extrémité 5' Celle-ci ne s'hybride pas Et puis une enzyme de restriction ne coupe que sur un ADN double brin donc je ne vois vraiment pas comment tout cel s'organise.  [...] Mais d'aprés ce que j'ai compris, c'est sur cette partie de l'amorce en trop ou qui ne s'hybride pas qu'on insère un site de restriction. Donc à cet endroit là, comment l'enzyme de restriction va t'elle couper si elle ne peut le faire que sur une région double brin et que le site de restriction correspond justement à une zone non hybridée ou simple brin.  [...]