• Forum - ADN, Sang, Solution

[Biologie Moléculaire] Meilleure technique d'extraction ?

bonjour, j'ai recueillis du sang total humain en présence d'EDTA, j'ai commis une faute en conservant ce sang à -80°C ce qui provoquera une hémolyse, est ce que je peux, comme même, extraire l'ADN à partir ce sang congelé SVP il n'ya pas une solution j'ai besoin d'aide.  [...] aucun probleme a mon avis. Je connais des gens qui récupèrent de l'ADN de sang congelé. Je te propose de chercher des protocoles sur internet, il y a pas mal de solutions. Par exemple. http.//www.protocol-online.org/prot/...ood/index.html.  [...]

[Biologie Moléculaire] un protocole fiable pou extraire l'ADN

je fais des extraction d'ADN à partir de sang humain atteint par le VIH,j'ai pas réussi a avoir un protocole convenable surtout pour la lyse des globules blancs.j'aimerais bien avoir une technique convenable et surtout fiable parce que mes ADN sont fragmentés et de mauvaise qualité(avec le détail des quantités de chaque réactif dans chaque solution ou bien simplement avoir la gentillesse de m'envoyer des sites ou des liens qui peuvent m'aider)merci infiniment.  [...] sinon je commence normalement par la lyse des globules rouges plusieurs lavages( solution.Tris,MgCl2,NaCl)et puis celle des blancs par (Tris HCl,EDTA,Nacl, et SDS..proteinase K...aprés éthanol absolu.  [...]

[Biotechnologie] solution hypotonique et lyse cellulaire

[Biotechnologie] solution hypotonique et lyse cellulaire.  [...] Après avoir fait travailler google je me tourne vers vous. Je me pose la question suivante. Pour extraire de l'adn à partir de sang total, on commence par faire éclater les rouges en solution hypotonique. J'aimerais simplement comprendre pourquoi les leucocytes résistent à ce traitement Est ce que c'est une question de quantité de canaux ioniques.  [...]

[Biochimie] Absorbance de la molécule d'ADN

Expérimentalement, on montre qu'une solution d'ADN simple brin a une absorbance plus élevé qu'une solution de même concentration d'ADN double brin, lequel a une absorbance plus faible qu'une solution de dNTP.  [...] Je pense que tout à été dit. Si la molécule d'ADN a une fluorescence propre, il me semble logique aussi que sous forme double brin, une émission de fluorescence pourra être plus facilement quenchée par les bases complémentaires (encore faut-il que l'émission soit à une longueur d'onde qui peut affecter de manière significative l'absorbance).  [...]

[Biochimie] Calcul d'une concentration en ADN

Bonjour, je voudrais savoir s'il existe un moyen de calculer la concentration d'ADN dans une solution avec comme seule information la masse d'unités osidiques que contient celle-ci (les bases, sucres et phosphates ont été séparés et sont toujours présent dans la solution).  [...] Le but de l'exo est de déterminer la quantité d'ADN plasmidique dans une solution de 100mL. On sait que la taille du plasmide est de 3500pb. On introduit dans la solution des enzymes qui détachent les sucres, bases et phosphates les uns des autres, puis on détermine qu'il y a 9,8g d'unité osidique dans la solution.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dosage de l'ADN

Le dosage d'une solution d'ADN par spectroscopie à 260nm indique une absorbance (DO) de 0,78. Quelle est la quantité d'ADN contenue dans 15µl de cette solution.  [...] Mais la ou je ne suis pas d'accord avec toi c'est que le nombre 0.456 vient dans l'enonce E, alors que l'on te dit que tu mesures 0.230 dans l'enonce C et on te dit que la quantite d'ADN de la solution en question est 109,65 mg/l en D. Donc, pour moi, il faut faire le calcul avec les donnees de C et D, avant de prendre une donnee de E.  [...]

[Biologie Moléculaire] Calcul pour avoir une solution d'ADN à 10ng/microlitre à partir d'une solution d'ADN à 50 nM

Ce que je ne comprend pas c'est le passage des nM au ng/microlitre. Ce n'est pas la même unité il me semble, pourtant nous avons fait une dilution comme s'il s'agissait justement d'une même unité. Est ce correct.   [...] Non ce n'est pas du tout correct. La correspondance entre la masse (en ng) et la quantité (en nM) dépend de la taille des ADN en question, plus précisément de la masse molaire des fragments considérés.  [...]

[Biologie Moléculaire] osmose hématies et leucocytes

Dans le but de faire une extraction d'ADN à partir de sang, j'ai recherché des protocoles m'indiquant qu'il fallait faire éclater les hématies par choc osmotique...J'imagine donc qu'il faut ajouter une solution mois concentré (comme de l'eau distillée je pense) mais comment faire pour que seul les hématies éclatent et non pas les leucocytes.  [...] effectivement les leuco sont plus résistants que les globules rouges. Pas au point de résister à de l'eau distillée cependant. Je ne me souviens plus de la recette de la solution de lyse que j'utilisais mais il y en a plusieurs ici. http.//www.jle.com/fr/revues/bio_rec.../article.phtml.  [...]

Calcul d'un concentration de départ d'ADN à partir de l'absorbance de la solution diluée.

Afin de déterminer la concentration d'une solution d'ADN, vous préparez un tube contenant. 3µl de cette solution d'ADN et 97µl d'H2O.  [...] La correction dans le bouquin me donne comme résultat. 9,5g/L d'ADN double brin, c'est bien ça (Sachant que je trouve plutôt 0,095g/L).  [...]

[Biotechnologie] Souches d'expression et préparation de plasmides

2) Dans l'obtention d'ADN plasmidique dans un kit (Ex. MINIPREP) pourquoi l'ADN chromosomique est t'il dénaturé par la solution de lyse (NaOH/SDS) et pas l'ADN plasmidique.  [...] On neutralise ensuite rapidement la solution, ce qui provoque la rénaturation brutale (réappariement des brins du duplex d'ADN). L'ADN chromosomique, très long (~10v pb), ne parvient pas à se réapparier complètement et forme des enchevètrements insolubles.  [...]