• Forum - ADN, Protéines, Intérêt

[Biochimie] Protocole de purification d'une protéine, vos avis

- Rôle. lors de la lyse cellulaire, les protéases susceptibles de dégrader nos protéines. Pour éviter la dégradation de notre Béta galactosidase, il faut un pH élevé (basique).  [...] on réalise l'Elution des protéines adhérée avec un tampon de pH inférieure au pHi de la beta galactosidase (avec un pH décroissant ) celle est chargée positivement et se décroche du support.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

Pour cela on clone dans un plasmide l'ADN codant pour la GST et l'ADN codant pour la protéine d'intérêt, de cette sorte les deux protéines sont fusionnées (elles sont accrochées l'une à l'autres).  [...] le pulldown après c'est parce qu'on utilise des billes couplées à des anticorps qui fixent la GST et sa protéine fusionnée, on peut laver puis éluer pour concentrer la protéine d'intérêt.  [...]

extraction ADN

je fait de l'extraction d'ADN avec TE, lysozyme, SDS, isopropanol et éthanol mais j'obtiens un ADN pas très propre (. 1 au spectro). on m'a dit de rajouter une étape avec le chloroforme mais celui nécessite une hotte chimique ce qu'on a pas. je voulais donc savoir par quoi on pourrai le remplacer.  [...] Ton extraction d'ADN, c'est plus par minipreps ou par midipreps, j'ai un protocole un peu alternatif pour faire des minipreps, mais je ne sais pas si c'est ca que tu cherches.  [...]

Transgene / Protéine Recombinante

Je ne comprends pas si on séquence d'abord le génome de notre organisme possédant le gène d'intérêt, pour par la suite attribuer à chaque gène une fonction et donc savoir que tel gène code pour tel protéine et ainsi à partir de la repérer notre gène d'intérêt. (Ma phrase est un peu longue désolé ).  [...] Généralement ce qu'on fait c'est qu'on séquence le génome et on repère des séquences d'intérêt (c'est-à-dire des séquences pouvant potentiellement coder des protéines). Ensuite à partir de ça on peut éventuellement prédire la fonction de la protéine qui sera produite (sur la base de comparaisons avec d'autres séquences ADN proches et de la structure tertiaire).  [...]

[Biologie Moléculaire] Traduction de l'ADN

ce que je peux te dire c'est que l'ARN polymerase est une prot traduite (comme toutes les proteines) dans le cytoplasme. Donc tous les facteurs proteiques necessaires a la transcription et la traduction se trouve en 1er lieu dans le cytoplasme avant de rentrer dans le noyau. mais je trouve quand meme bizarre.  [...] Connais-tu la localisation exacte de cet ADN Cytoplasmique signifie entre le noyau et la membrane plasmique, et cela inclus les organites, or certains possèdent de l'ADN et la machinerie nécessaire à leur transcription (mitochondries et chloroplastes).  [...]

précipitation proteine

Oui ou alors tu peux peut-être tenter de taper le nom des auteurs sur Science-direct ou sur Pubmed mais comme l'a dit Nayeki, tu auras du mal à trouver le PDF d'un papier de 1975. Tu peux peut être regarder aussi dans les protocolles des fabriquants style Sigma, Merck, etc.   [...] a ceux que ca interesse, la polymin-P permet de detruire les membranes des gram-. Elle permet aussi de precipiter les ADNs et tout ce qui est fixé dessus et donc dans mon cas, la RNA pol vu qu'elle n'existe pas ou trés peu libre dans la cellule.  [...]

[Biochimie] pH protéines hydrosolubles animales

Le pH des protéines hydrosolubles n'a pas d'importance dans la solubilisation des protéines. Il faut simplement être dans un tampon permettant de maintenir les protéines en solution.  [...] Comment pourrai-je vérifier que les protéines d'intérêt sont bel et bien dans ma solution Par un dosage par la méthode de Bradford par exemple.  [...]

transcription inverse Proteine

En effet ça existe peut-être mais je vois pas l'intérêt d'un organisme d'avoir ce type de protéine...Chez les virus à ARN, y avait tout intérêt à ce qu'ils aient la RTase (Reverse Transcriptase ) pour pouvoir infecter les organismes à ADN. Mais un organisme possédant une traductase inverse.  [...] Mais je n'avais pas fait de supposition quand au rôle des protéines éventuellement rétro-traduites et à leur intérêt positif ou négatif pour la cellule.  [...]

Dominant Négatif

C'est assez typique des protéines multimériques ou il suffit d'avoir l'un des monomères inactif pour abolir totalement l'activité de l'enzyme.  [...] Par tranfection d'ADN mutee en general ou microinjection de proteine ou ARN. La modification du genome reste nettement plus delicate et quitte a inactiver la fonction d'une proteine autant enlever carrement le gene d'interet.  [...]

[Biologie Moléculaire] Southern blot !!!

L'ADN de sperme de saumon permet, pendant le southern blot (et d'autres techniques comme le gel shift (EMSA)), d'empêcher les interactions non spécifiques avec la sonde (un peu comme la BSA ou le lait dans les western blot ou en immunohistochimie).  [...] le but de la sonde est de detecter l'adn d'interet, alors pourquoi la préhybridation vu qu'elle va s'hybrider avec notre adn recherché.  [...]