• Forum - ADN, Protéine, Intérêt

[Biologie Moléculaire] Traduction de l'ADN

ce que je peux te dire c'est que l'ARN polymerase est une prot traduite (comme toutes les proteines) dans le cytoplasme. Donc tous les facteurs proteiques necessaires a la transcription et la traduction se trouve en 1er lieu dans le cytoplasme avant de rentrer dans le noyau. mais je trouve quand meme bizarre.  [...] mais j'ai trouver que cet ADN nagé dans le cytoplasme peut etre transcrit puis traduit en la proteine d'interet.  [...]

précipitation proteine

J'ai vu dans bcp de papier, que pour purifier une RNA polymerase, il fallait aprés lyse des cellules faire une précipitation à la polymin-P suivie d'une précipitation au sulfate d'amonium. Je me suis un peu renseigné et la polymin-P (Polyethylenimine) me semble surtout capable de precipiter les ADNs.   [...] a ceux que ca interesse, la polymin-P permet de detruire les membranes des gram-. Elle permet aussi de precipiter les ADNs et tout ce qui est fixé dessus et donc dans mon cas, la RNA pol vu qu'elle n'existe pas ou trés peu libre dans la cellule.  [...]

Problem:vecteur contenant GFP ne fluore pas

j'ai crée un vecteur. promoteur 35S, suivi de l'ADN de ma proteine d'interet, suivi de GFP4. J'ai transformé mes petites Arabidopsis, ai sélectionné les transformées.. les ai observées avec microscope confocal..... et rien...aucun signe de fluorescence. je ne comprends pas.  [...] Rebondissement. j'ai fait une extraction DNA, suivie d'une PCR pour déterminer si mes plantes -resistantes à BAsta, je tiens à le préciser..- contenait 35Scassette/proteine/GFP... le vide complet. apparemment ma transformation n'a pas fonctionné. GFP n'est pas en cause.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

Pour cela on clone dans un plasmide l'ADN codant pour la GST et l'ADN codant pour la protéine d'intérêt, de cette sorte les deux protéines sont fusionnées (elles sont accrochées l'une à l'autres).  [...] c'est ça. Le truc c'est qu'il n'existe pas toujours d'anticorps dirigés contre les protéines d'intérêt ou d'anticorps bien spécifiques alors que ceux qui reconnaissent la GST le sont. Il existe aussi des techniques pour récupérer la protéine sans le tag à la fin, par exemple en clonant un site de restriction SapI entre le cDNA de la prot et celui de la GST.  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

Ca dépend. Vu que tu fais une protéine de fusion, tu ne peux exclure que le domaine GFP ne gêne la protéine d'intérêt (par encombrement par exemple). Dans ce cas tu peux essayer les deux types de construction, voire insérer un linker entre les deux domaines afin de les espacer un peu.  [...] -. Enfin concernant la façon de faire l'ADN recombinant (Stathmine-GFP, ou alors l'inverse). Le seul probleme qui pourrait intervenir c'est dans l'ordre de repliement de la proteine (qui se fait au cours de la traduction pour les acide aminés deja polymerisés) qui fait que j'obtiens pas la meme proteine selon le sens d'appariemment de mes deux genes d'interet dans l'ADN recombinant, non.  [...]

transcription inverse Proteine

En effet ça existe peut-être mais je vois pas l'intérêt d'un organisme d'avoir ce type de protéine...Chez les virus à ARN, y avait tout intérêt à ce qu'ils aient la RTase (Reverse Transcriptase ) pour pouvoir infecter les organismes à ADN. Mais un organisme possédant une traductase inverse.  [...] Oui l'idée fait un peu rêver, mais sérieusement je ne vois vraiment l'interêt d'une cellule de synthétiser une protéine et de prendre le chemin inverse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Diminution de pb lors de la PCR

Bonjour. Lors d'une technique de PCR, j'aimerais savoir comment est-il possible d'obtenir un produit PCR vraiment plus petit (environ la moitie), en terme de paire de base, que ma proteine d'interet initial J'ai eu beau chercher mais la seul explication que j'ai trouvé est que le temps d'élongation du brin par la polymérase n'est pas suffisament long et que celui-ci n'a pas eu le temps de bien répliquer l'ADN.  [...] Du coup, au final, vous observez mieux le petit fragment et que votre fragment d'intérêt. L'effet sera d'autant plus marqué que le petit fragment sera petit devant le grand fragment.  [...]

[Biochimie] Protocole de purification d'une protéine, vos avis

On introduit un volume de tampon phosphate à notre solution de protéine afin que la protéine soit chargée négativement et qu'elle adhère au support de DEAE-cellulose chargée positivement.  [...] Apres l'étape sur la colonne monoQ ca me semble une très bonne idée. Tu pourrais faire une gel filtration avant pour ne garder que les fractions contenant ta protéine si tu veux.  [...]

[Biologie Moléculaire] Criblage d'une banque d'ADNc

quand on cherche un gène d'intérêt il y a le truc d'intérêt-. la protéine et donc à partir de la protéine on trouve toutes fois le gène correspondant et c'est facile de connaitre la protéine, il suffit d'utiliser la northern blots.  [...] - essayer de cribler un ADNc d'intérêt avec le minimum d'information à partir de la protéine d'intérêt suivant tout la procédure du criblage d'une banque d'ADNc.  [...]

[Biochimie] Différence western blot / immunoprécipitation

Certes, mais le gros intérêt de la technique est qu'une fois la protéine d'intérêt précipitée, on peut révéler des protéines qui interagissent potentiellement avec elle puisqu'elles auront été entraînées également. Et ça on ne peut le faire en wb.  [...] Du coup cette raison me semble valable et j'y avais pensé, c'est mieux d'avoir la seule protéine sur la membrane plutôt que toutes les autres avec, même si l'anticorps n'est censé révéler que la protéine d'intérêt.  [...]