• Forum - ADN, Organique, ARN, Phase aqueuse

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

J'ai bien compris cela, mais en quoi l'ARN est différent de l'ADN puisque j'ai trois phases au final. la phase organique, rose contenant les protéines, la phase aqueuse contenant l'ARN et au milieu, la phase intermédiaire qui correspond à l'anneau d'ADN.  [...] J'ai dû mal m'exprimer, je sais que le trizol ne permet pas de les séparer, mais qu'il lyse seulement les cellules. Au labo dans lequel je suis on m'a pourtant expliqué que le colorant pr ésent dans le trizol était soluble dans les solvant organique, ce qui fait qu'il se retrouve en bas (puisque visuellement j'ai bien une phase organique rose), que l'anneau du milieu représentait l'ADN, et la phase aqueuse en haut regroupait les ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

En fait, il faut savoir que les ARN sont sensibles au pH alcalin et en général, l'extraction ADN se fait en phenol/Chloroforme/IAA à pH 8 et nous aurons l'ADN en phase aqueuse avec les ARN endommagés, ce qui ne gêne pas pour certaines analyses mais pas pour d'autres d'où l'action de RNase dans certains cas.  [...] Pour l'extraction des ARNs, le P/C/IAA doit être à pH acide (~5), ce qui va dénaturer l'ADN pour se retrouver dans la phase organique et pour ne trouver que les ARN dans la phase aqueuse.  [...]

demande d'infos!!! extraction de l'ADN

mais ce que Je cherche c'est un document détaillé de la chose, avec les protocoles mais surtout les principes de chaque étape … j'ai un tas de documents tiré via divers moteurs de recherche… mais aucun ni complet, soit il n'y a que le protocole, soit on ne parle que de certains aspects de la manipe….   [...] - Après avoir placé le melange contenu cellulaire/phenol, il faut agiter afin que l'ADN puisse se retrouver dans la phase aqueuse que l'on recupère après avoir centrifugé. 2 phases sont visibles. la phase aqueuse au dessus contenant l'ADN, la phase organique contenant l'ARN et l'interphase contenant les protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] ADN ARN extraction

J'ai un petit problème en TP de biologie moléculaire, c'est lors de l'extraction de l'ADN et de l'ARN. Ma question est. pourquoi l'ADN, à pH basique se retrouve en phase aqueuse, et pourquoi l'ARN se retrouve en phase aqueuse (tous les 2 lors de l'extraction bien entendu).  [...] Attention. pour faire des extractions d'ARN, il faut un phenol acide, et pour l'ADN un phénol tamponné. Si tu prends un phenol acide pour une extraction d'ADN, tu as un rendement très bas, car l'ADN reste dans le phenol et non dans la phase aqueuse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN ethanol 70%

Je pr épare des TP de biologie moleculaire à la fac, dont un sur l'extraction des ARN. Après avoir extrait l'ARN des cellules avec du TRIZOL, on obtient 2 phases, la phase organique (phase inferieure avec phénol et chloroforme) et une phase aqueuse avec les ARN.  [...] Ensuite, il s'agit de pr écipiter les ARN, on incube avec de l'isopropanol, à quoi sert t'il dans la pr écipitation Après centrifugation on enlève le surnageant, et on ajoute de l'ethanol a 70%. On me pose la question pourquoi 70% et non ethanol pur J'imagine que la différence se fait au niveau de la fraction d'eau de l'ethanol 70% mais je ne sais pas quoi répondre.  [...]

[Biologie Moléculaire] biologie moléculaire

Tu lyse tes cellules avec un réactif acide contenant de l'isothyocyanate de guanidium et du phénol. On fait une séparation par centrifugation avec du chloroforme ou du bromochloropropane. Tu obtiens une phase aqueuse (ARN), une interface et une phase organique.  [...] Les deux techniques les plus employées en laboratoire pour extraire de l'ADN plasmidique (je ne sais pas s'il y en a d'autres) sont. l'extraction au phénol-chloroforme et l'extraction à l'aide de kits industriels, type OMEGA, Sigma-Aldrich...etc. La première permet de récupérer une plus grosse quantité d'ADN plasmidique que la seconde, mais est plus délicate à réaliser.  [...]

[Biologie Moléculaire] Resolubilisation des proteines aprés extraction au trizol

En fait on a ajouté à l'echantillon d'hypophyse 800 µl de Trizol. Aprés homogeinisation, on a incubé pendant 5mn. Ajout de chloroforme (incubation 3mn) et centrifugation à 12 000 tours pendant 15mn à 4°C. On a obtenu une phase aqueuse transparente contenant L'ARN et une phase rouge contenant l'ADN et les proteines.  [...] Après avoir récupéré la phase rouge contenant l'ADN et les protéines, on a ajouté 300µl d'éthanol 100% pour précipiter l'ADN. Après incubation 3mn, on centrifuge à 4600 tours pendant 5 mn. On prélève la phase aqueuse à laquelle on ajoute 1ml d'isopropanol pour précipiter les protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN plasmidique

Pour le phenol, il se trouve qu'avant il fallait le saturé soit même et maintenant il s'achète tout fait, enfin saturé quoi. Pour l'extraction d'ADN on utilise du phénol saturé avec du tris et pour l'extraction d'ARN avec de l'eau. A ce que l'on m'a dit, les ARN reste dans la phase aqueuse et les protéines resteraient dégradées à l'interphase.  [...] Un volume d'éthanol 100% froid est ajouté au surnageant afin de précipiter l'ADN plasmidique pendant 5 minutes à température ambiante. Après 5 minutes de centrifugation à 10000 g, le surnageant est éliminé et le culot est lavé dans une solution Tris 0,1 M / éthanol 70% puis dans l'éthanol 100%.  [...]

[Biochimie] Les lipides

Ton truc la c'est juste un mélange de deux phases. une phase organique (huile) et une phase aqueuse (eau).  [...] eau+huile+noir soudan+ détergeant. le détergent crée des micelles qui permettent une émulsion d'huile dans l'eau, les lipide noires doivent apparaitre gris et bien homogènes dans la solution... On n'a plus deux phases mais une seule et les lipides en solution sous forme de micelles.  [...]

TE dans phenol-chloroforme

Bonjour, je dois suivre un protocole où je dois ajuster le pH du phénol-chloroforme-alcool isoamylique avec de l'acétate de sodium (50mM) à 4,7.   [...] salut. oui j'extrait l'ARN du sol. Et apparemment l'acétate de sodium et à pH5 si on fait le tampon avec l'acide acétique, je pense que je vais faire ça, merci beaucoup pour votre reponse.  [...]