• Forum - ADN, Membrane, Solution

[Biologie Moléculaire] Réalisation d'un Southern Blot

Sans etre sur, (n'ayant jamais fait de southern) j'aurais tendance a penser que le SDS en tant que detergeant anionique permet de laver la membrane et de decrocher les interractions non specifique entre l'ADN (charge -) et la membrane de nylon (chargee +). Le SDS va prendre la place de l'ADN.  [...] Pour imager un peu, le SDS est un savon, et on lave mieux avec du savon que sans. et comme le nylon chargé positivement des membranes n'est pas forcement très hydrophyle, il permet aussi de mieux réaliser l'interface entre ADN/Membrane et la solution.  [...]

[Biochimie] Western blot incubation Ac I sous sachet scellé

Et dernierement j ai mis ma membrane sous scellé dans un sachet, qui était assez rempli de solution, et je pense que la solution ne bougeait quasiment pas sur la membrane.  [...] J'utilise cette technique aussi, je sais que je fais en sorte qu'il y ait quelques petites bulles d'air pour voir la solution bouger sur la membrane.  [...]

[Physiologie] Osmolarité cellulaire et membranes perméables

Soit 2 compartiments rigides séparés par une membrane perméable uniquement à l'eau et contenant chacun 1L de solution.  [...] Soit 2 compartiments séparés par une membrane perméable uniquement à l'eau et contenant chacun 1L de solution.  [...]

[biologie moléculaire] Southern blot

est ce que tu utilises une nylon membrane combien de temps tu attends apres avoir directement pose ton dna sur la membrane comment tu le denatures (NaOH), fixe (UV light) et est ce que tu utilises une solution church pour prehybrider est ce que tu penses que c'est possible de m'envoyer ton protocole qui a marche.  [...] Je veux faire ca car apres je veux refaire la manip en deposant non pas de l'ADN sur la membrane mais une colonie de E.coli. Et le lavage par NaOH me servira non seulement a denaturer l'ADN mais aussi a casser la cellule (car je dois en fait faire un southern sur une library entiere de cellules..).  [...]

condition isotonique ....

Solution hypotonique. dans tes cellules sanguines, la somme des concentrations de toutes les molécules présentent dans celles ci forment ce que l'on appelle l'osmolarité (300 mmol/L). Si tu plonges ces même cellules dans une solution d'osmolarité 100 mmol/L (ex solution avec du sodium à 25 mmol/L + potassium à 75 mmol/L) tu vas donc avoir une différence de d'osmolarité de part et d'autre de la membrane de tes cellules.  [...] Si V diminie mais que N est constant (rappel, membrane idéalement semi-permeable) alors C augmente) Solution isotonique, iso, même, donc même osmolarité, rien ne se passe, pas de différences de concentrations, donc pas d'égalisation à faire, donc pas de flux d'eau.  [...]

[Biochimie] osmose

L'osmose est un phénomène de diffusion à travers une membrane semi-perméable, sous l'action d'un gradient de concentration. Le phénomène d'osmose peut se traduire par un flux d'eau dirigé d'une solution diluée vers une solution concentrée à travers une membrane.  [...] En effet considérons deux solutions aqueuses de concentrations différentes et séparées par une membrane perméable. La membrane va laisser passer les molécules d'eau tout en retenant les substances dissoutes, l'eau va diffuser de la solution hypotonique, c'est-à-dire la moins concentrée, vers la solution hypertonique, c'est à dire la plus concentrée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transfert d'ADN

Pourquoi ne peut on pas transferer l'ADN sur une membrane de nitrocellulose avec du courant(même principe que pour les protéines)(western).  [...] Quelle sont les meilleures façons de transferer l'ADN sur une membrane (A part le southern).  [...]

Les spores

La bactérie copie son ADN, isole l'ADN copié puis la membrane plasmique de la bactérie entoure l'ADN copié. Là c'est la préspore qui se forme. Ensuite du peptidoglycanne se dépose avec des protéines sur la membrane, suivit d'une déshydratation de la spore.  [...] Pour préciser un aspect qui pourrait t'intéresser vu ton projet, la spore est une forme de survie extrême. Comme l'a précisé artB, il faut que la bactérie soit dans des conditions qui ne lui sont pas idéales pour que la sporulation soit déclenchée, donnant une structure dormante, une bonne comparaison serait la graine des plantes.   [...]

transgenese

bonsoir à tous j'ai une petite question en ce qui concerne une technique utilisée en transgénése l'incubation de ládn avec des spermatozoides j'aimerais savoir par quel mecanisme l'adn étranger reussit il á traverser la membrane du gaméte et rejoindre le noyau.  [...] On insère le gène thérapeutique compacté dans une sphère formée par une double membrane lipidique le tout étant chargé positivement. Ce liposome fusionne avec la membrane cellulaire après liaison aux protéines membranaires négatives et l'ADN est intégré par endocytoses en évitant toutes dégradations extracellulaires.  [...]

[Biologie Moléculaire] Southern blot !!!

Plus précisément, si on ne l'utilise pas, on a des intéractions nitrocellulose-sonde parce que la membrane est chargée positivement (liaisons hydrogènes ou électrostatiques ) et que la sonde est ainsi bloquée.  [...] C'est pour cela qu' avant de mettre les sondes en contact avec la membrane, on met la membrane en contact avec de l'ADN de saumon qui la recouvre entièrement.  [...]