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je suis en mode panique pour mon rapport(transfo levure)

Bonjour tous le monde, je en BTS anabiotech, et la j'aurai besoin que quelqu un m explique clairement le principe de la transformation des levures par choc thermique avec le PEG et le acétate de lithium (en vue de réalisé un double hybride).  [...] La pénétration de l'ADN dans les levures ainsi traitées est stimulée par choc thermique. L'ADN étranger peut être maintenu dans la cellule transformée sous une forme intégrée à l'ADN chromosomique par recombinaison homologue ou bien sous une forme réplicative indépendante du chromosome.  [...]

principe de transformation des levures?

Etape importante on utilise des sphéroblastes. c'est-à-dire des levures dépourvues de paroi (tout l'assemblage de sucres et de protéines au-delà de la membrane plasmique), on les obtient par réaction enzymatique (pectinases je ne sais plus).  [...] le principe est tres simple le PEG et le LiAc perméabilisent la membrane de le levure, ensuite grace a un choc thermique l'ADN pénettre dans la cellule.  [...]

[Génétique] Mutation par ajout d'adn: qu'est-ce qui se passe vraiment?

Certaines especes sont capables d'incorporer naturellement de l'ADN, meme en absence de choc thermique (d'ailleur le choc thermique ne marche que si les bactéries ont été préparées au préalable).  [...] alors là je ne sais pas. Mais je crois avoir une petite idée. si la solution d'adn ne contient qu'une séquence d'adn où se trouve le gène responsable de la synthèse du tryptophane, la bactérie ne peut pas devenir diploïde. Sinon, si la solution d'adn contient un chromosome entier identique à celui de la bactérie.  [...]

transfo de levure

question sur la transfo de levures...Faut il placer les levures dans la glace après les avoir laisser qq minute à 42°c pour créer un choc thermique comme pour les bactéries chemically competent ou n'est ce pas la peine.  [...] Non ca n'est pas utile, tu centrifuges rapidement, puis tu retires le PEG/Liac, tu resuspend dans le milieu adequate et tu etales sur tes boites de selection.   [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction de l'ADN de cellules eucaryotes, lyse

tu peux egalement effectuer un choc osmotique(qui consiste a mettre tes cellule dans un milieu hypotonique) ainsi un flux d'eau entre dans tes cellules,gonfle et eclate par choc osmotique.  [...] pour la suite du protocole d'extraction d'ADN, on utilise le phénol et le chlorophorme à partir de notre lysat cellulaire c'est bien ça ou bien doit-on préalablement centrifuger pour éliminer l'eau.  [...]

Expériences en génétique…

Oui alors là je crois qu'il y a effectivement quelques confusions. Si tu veux transformer une bactos rendu compétente (par du Ca2+ et non pas par du Na+), tu as plusieurs possibilités dont le choc thermique (celle que j'utilise habituellement) qui consite en un passage d'environ 45 secondes à 42°C, ou également la lipofection, l'électroporation, etc.  [...] En biologie moléculaire, on utilise ces plasmides pour intégrer des morceaux d'ADN dans des bactéries rendues compétentes, c'est-à-dire perméables, l'ADN rentre tout seul dedans grâce à un choc électrique ou un choc thermique.  [...]

[Génétique] Help! tp génétique, analyse clonage

Ou plutôt les bactéries étaient compétentes (électro- ou thermocompétentes) et vous avez fait une transformation avec vos plasmides recombinants au sein desquels vous aviez auparavant cloné un insert.   [...] Une bactérie compétente est dans ce cas précis une bactérie dont la membrane (ou la paroi) a été rendue perméable d'une telle manière qu'elle permet l'entrée d'ADN double-brin. Les façons les plus courantes sont l'électroporation (un choc électrique fait que la paroi/membrane sera trouée ) ou le choc thermique (même résultat, mais en appliquant des T°C différentes).  [...]

transformation levures

J'ai une petite question, j'a réalisé une transformation de levures avec la méthode du LiAc. A la fin il faut réaliser une choc thermique en passant les tubes 30 min à 30°C puis à nouveau 30 min à 42°C. Seulement ayant eu la tête en l'air j'ai d'abord mis mes tubes une demi-heure à 42°C.  [...] Sinon je dirais comme Yoyo, la transformations de levures par LiAC n'est pas compliquée et donne un bon rendement si tu tiens compte des conseils de Yoyo.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transformation au CaCl2

Bonjour, j'ai deux petites questions a propos de deux étapes de la transformation cellulaire au CaCl2. 1- Quel est l'utilité du choc thermique après l'ajout du CaCl2 Moi je crois que cette étape sert a insérer le vecteur dans la cellule. 2- pourquoi préchauffer le milieu SOC avant étalement sur gélose Quel sont les avantages et les composantes au milieux SOC Merci.  [...] Pour faire de la transfection, il faut faire entrer un gros truc dans une cellule, protégée par une membrane plasmique imperméable. Un choc thermique (ou électrique) induit un stress important qui fragilise la membrane, et facilite l'entrée de l'ADN. Ca tue pas mal de cellules, mais la transfection est un compromis qui permet au final de garder quand même des cellules vivantes ET qui ont recu de l'ADN.  [...]

[Microbiologie] Protocole d'induction d'apoptose par choc thermique

[Microbiologie] Protocole d'induction d'apoptose par choc thermique.  [...] Est-ce que quelqu'un connaît une façon de procéder en utilisant uniquement le choc thermique svp.  [...]