• Forum - ADN, Fragment, Plasmide

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

Nous avons fait une clonage d'un ADNc dans un plasmide... En parallèle, nous avons fait un contrôle négatif qui contenait le vecteur mais sans insert (l'insert étant remplacé par de l'eau distillée). J'aimerais savoir à quoi sert exactement le contrôle négatif.  [...] Par contre, je suis d'accord avec le fait que mettre l'insert n'est pas absolument nécessaire. Un contrôle plasmide digéré + ligase en ayant fait un gel rapide pour vérifier que la digestion est totale est suffisant pour vérifier l'activité ligase. Dans ce cadre, la déphosphorylation ajoute une inconnue énorme puisqu'avec ce contrôle on ne peut pas faire le différentiel entre un plasmide mal déphosphorylé, un plasmide trop déphosphorylé où les extrémités ont commencé à être dégradées par CIP et qui n'est pas ligable, et une activité ligase faible.  [...]

Intégration dans un plasmide

Non, c'est pas systematique. Ca depend de la qualité de tes digestions, de la taille de ton vecteur et de ton insert. Par contre, ce genre de construction se fait in vitro. Tu transformes ensuite la bacterie par ton plasmide. Pour integrer un fragment d'ADN dans un plasmide deja dans une cellule, je dirais que tu ne peux le faire que par recombinaison homologue, mais c'est bcp plus compliqué et j'ai jamais entendu d'une telle manip pour modiifier des plamisdes.  [...] C'est pour cette raison qu'on utilise un vecteur d'ADN circulaire pour introduire un gène dans une bactérie. Ce vecteur est souvent un plasmide modifié (avec de nombreux sites d'intégration possibles, un promoteur fort avant ces sites, des gènes de sélection pour pouvoir distinguer les bactéries qui ont intégré le plasmide...).  [...]

[Biologie Moléculaire] electrophorèse en gel d'agarose

pour les canals 2 3 et 4 j'ai compris que puisqu'il n'y a qu'un site de restriction, le plasmide est ouvert à un endroit et le fragment est toujours de même taille. Mais je ne comprends pas ce qu'il en est du canal 1, le plasmide est pas digéré et on a plein de fragments de tailles différentes.  [...] Un plasmide n'est pas une cellule. C'est un fragment petit d'ADN circulaire doté d'une capacité autoréplicative. Faire cette erreur c'est un peu comme confondre un chromosome avec une cellule.  [...]

[Génétique] Plasmide

comment purifier le fragment linéaire apres amplification du plasmide pBR 322 dans escherichia coli et extraction de l'adn plasmidique.  [...] Lors de ta PCR t'as surement utilisé des amorces contenant des sites de restriction que tu dois utiliser donc voila tu commence par faire une digestion avec ces enzymes, tu dépose ensuite sur gel pour récuperer ton fragment, et ensuite tu purifie alors il existe plusieurs techniques de purfi pour des produits PCR recuperes à partir de gel.  [...]

[Biologie Moléculaire] [biologie moleculaire] Le code génétique

1. recherche d'homologie -. 2. clonage du fragment d'ADN cense contenir le gene -. 3. analyse de l'expression de ce gene (deletion, expression etc..).  [...] 1. identification d'un phenotype mutant -. 2. recherche par complementation du fragment d'ADN permettant de restaurer le phenotype sauvage -. 3. analyse de ce fragment d'ADN.  [...]

[Génétique] Génome.

Je parlerai plutôt de l'ensemble du matériel génétique, de façon à ne pas éluder les éléments tels que les plasmides, notamment pour les organismes procaryotes.  [...] Apparemment c'était un problème de méthodologie, l'outcrossing étant favorisé chez le mutant hothead, la reversion serait en fait une contamination du a du pollen issu de plant wild type.   [...]

Banque d'ADN

Pour effectuer une banque d'ADNg d'un organisme, si j'ai bien compris, il suffit de mettre l'ADNg en présence d'une enzyme de restriction et de vecteurs. Nous nous retrouvons alors avec un ensemble de plasmides contenant chacun un fragment d'ADN.  [...] Les banques d'ADNg ne permettent pas d'isoler de gènes en particulier, mais plutôt des fragments d'ADN, qu'on doit par la suite cribler.  [...]

[Evolution] Evolution de la reproduction aséxuée

Je n'arrive pas a comprendre comment l'évolution a pu permettre le maintien de la reproduction asexuée chez les bactéries Étant donné, que cette manière de perdurer l'espèce ne peux répondre rapidement a un changement de l'environnement, par rapport a une reproduction sexuée qui créer de nouveau organismes uniques.   [...] Bien que ne disposant pas de la reproduction sexuée, les bactéries disposent de moyen d'echanger des fragments de gènes et donc de propager leurs évolutions. Trois mécanismes interviennent principalement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de clonage dans le pGEM-T easy vector.

Comment est-ce possible d'avoir des colonies blanches (qui restent blanches après +sieurs jours au frigo) et de ne pas avoir d'ADN plasmidique dedans.  [...] Ce qui me semble étrange, c'est que si l'ampicilline était vraiment inactif, j'aurai du obtenir beaucoup plus de colonies sur mes plaques de contrôles et de transformation (en moyenne 40 colonies obtenues). Mais j'ai vraiment du mal à comprendre comment c'est possible d'avoir les colonies blanches et de n'avoir aucun ADN plasmidique sur le gel ensuite.  [...]

Animaux transgéniques

selon le promoteur choisi, qui va permettre l'excision du fragment d'ADN ciblé.  [...] La cre (recombinase) est placée sous le controle d'un promoteur qui code pour un gène s'exprimant soit à un certain moment, soit selon une localisation précise, soit les deux (il existe certains raffinements, ex. système CreER T2 ).   [...]