• Forum - ADN, Forme, Plasmide

[Génétique] Production de souris transgéniques

L'ADN injecté peut être sous forme de plasmide, ou si jamais on veut insérerer un gros morceau d'ADN, sous forme de BAC.  [...] Les FRT, c'est pas pour l'injection en elle même. C'est juste que si tu le souhaite, tu peux placer autour de ton gène d'intérêt des sites FRT. Ca permet, si tu fournis une source de flipase, d'induire une recombinaison site-spécifique et donc d'exciser le gène placé entre les séquences FRT.   [...]

cellules competentes

est ce que quelque un aurait des informations sur les cellules beta compétente de e coli.  [...] On dit que des bactéries sont compétentes lorsqu'elles présentent des trous dans leur membrane qui leur permet d'intégrer de l'ADN exogène. Ces bactéries sont notamment utilisées dans le contexte de transformation bactérienne, c'est-à-dire de l'introduction d'ADN (souvent sous la forme de plasmide), pour l'amplification de ce plasmide.  [...]

transgenese

L'ADN nu contenant la séquence thérapeutique est injecté sous forme de plasmide bactérien dans le tissu cible. Il est ensuite intégré dans les cellules par des mécanismes encore inconnus.  [...] De l'ADN plasmidique est injecté dans le tissus cible (par exemple le muscle de la patte d'une souris) puis on applique deux plaques d'acier contre la patte qui servent ainsi d'électrode, on envoie ensuite des impulsions électriques répétées, en essayant de trouver les fréquences et intensité correspondant au meilleur transfert.  [...]

RT-PCR et PAGE en conditions dénaturantes???

Par southern blot en effet, maintenant quand tu fais migrer de l'ADN simple brin tu te mets en présence d'urée afin d'eviter les structures secondaires que l'ADN pourrait former.  [...] C'est sutout vrai pour la migration d'ADN circulaire, type ADN bactérien, mitochondrial ou encore plasmide. On obtient souvent 2 bandes correspondants à une forme enroulées qui va se faufiller dans le gel, et une bande de plus haut PM apparent. Je ne me rapelle pas avoir utiliser de l'urée pour un northern ou un southern blot.  [...]

[Biologie végétale] pcr : LP/RP et LB/RP pour une plante

Le T-DNA, c'est de l'ADN contenu dans un plasmide. Ce n'est pas de l'ADN génomique normal, c'est de l'ADN supplémentaire, de forme circulaire. A l'origine, cet ADN est la marque d'une plante qui a été infectée et qui est malade. On se sert actuellement de ce plasmide comme outil en biologie moléculaire.  [...] Il semblerait que ton gène A ou a, chez tes plantes, est porté par ce type de plasmide et non dans son ADN original. On est dans un contexte de transgenèse dans ton exo.  [...]

[Biologie Moléculaire] plasmide nucléoide adn... tout embrouillé!!

1. il me semblait avoir compris que l'adn bactérien était sous forme d'un seul adn, et puis ensuite on m'a parlé de plasmides, je me suis dit, ok c de l'adn en plus (mais ca me paraissait un peu louche) et puis j'ai compris (mais jai peut etre tord.) que l'adn bactérien est sous forme d'un adn circulaire double brin = 1 plasmide.  [...] L'adn bactérien est bel et bien sous forme circulaire. Quand on parle tu chromosome bactérien, on parle de cet adn circulaire. Néanmoins, dans les bactéries, tu as des structures supplémentaires qui sont des plasmides. la aussi c'est circulaire, la aussi c'est de l'adn.  [...]

[Biochimie] Restriction bizarre

Je dirais donc que dans le puits 1 il y a les formes superenroulée (bande du bas) et circulaire relâchée (bande du haut) du plasmide. Avec BgIII il y a 2 coupures vu qu'on observe deux morceaux d'ADN, et avec PvuII il n'y a qu'une coupure et on obtient la forme linéaire du plasmide.  [...] ou bien vu que l'echantillon 4 ne semble exister qu'en forme linéaire, il est possible qu'avec PvuII, il n'y ai pas de coupure (si la coupure pour donner la forme linéaire a été faite au niveau du site de restriction que reconnait PvuII), ou alors 2 fragments et donc 2 bandes qui migrent plus loin que la simple forme linéaire du plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Explications rapides sur la PCR

C'est LA base de la PCR, l'ADN polymerase a besoin d'une amorce pour commencer la réplication de l'ADN. L'idée de génie est de créer cette amorce pour amplifier un morceau d'ADN souhaitée. Comme il y a deux brins sur une molécule d'ADN, il en faut deux.  [...] Enfin, quelqu'un peut-il me faire un petit résumé rapide des avantages / inconvénients / spécificité de ces deux méthodes ( amplification par plasmide, et amplification par PCR ).  [...]

[Biochimie] Question théorique sur clonage TOPO

Le plasmide pCR4 Blunt-TOPO vector (Figure11) nous est fourni sous forme linéaire, il possède en 3' une topoisomérase I du virus Vaccinia. Cette topoisomérase a la capacité de se fixer à des sites spécifiques de l'ADN et de cliver celui-ci au niveau des liaisons phosphodiesters, après le motif 5'-CCCTT.  [...] Je ne comprends pas comment on peut avoir une extrémité 5'hydroxyl j'ai lu sur internet que le produit PCR ne possédait pas d'extrémité 5'phosphate, est-ce pour cela Et si c'est le cas comment cela est-il arrivé je suis sûre qu'il s'agit d'une extrémité 5'hydroxyl car cela est écrit dans le manuel d'utilisation du plasmide (PCR4 blunt topo vector).  [...]

[Génétique] pb clonage moléculaire

Traitement de l'ADN linéarisé du plasmide vecteur avec la phosphatase alcaline qui enlève les groupes 5' phosphate terminaux évité la recirculation du vecteur et la formation de dimères de plasmide. Après ce traitement, on puisse donc ajouté l'insert.  [...] Une masse moléculaire peu élevée des plasmides car, ils sont faciles à manipuler, ils sont présents en beaucoup d'exemplaire ce qui facilite leurs isolement, mais surtout amplifier l'expression de tout les gène qui y sont clonés. En plus leur taille augmente la probabilité d'y trouver des sites de restriction unique.  [...]