• Forum - ADN, Fonction, Température

[Biologie Moléculaire] Température de fusion

Voici ce que dit internet (traduit de l'anglais). les nucléotides LNA sont des analogues d'acide nucléique contenant un pont méthylène entre l'hydroxyle en position 2 et l'atome de carbone 4 du sucre confèrant la conformation idéale pour l'hybridation. Cela a pour conséquence que les LNA présentent une grande stabilité thermique lorsqu'elle est hybridée à un brin d'ADN ou d'ARN complémentaire.  [...] Sa conformation fait que la température de fusion Tm augmente de 5°C par nucléotide LNA.  [...] Les petites tailles des microARN les rendent difficiles à analyser à l'aide des méthodes traditionnelles de qPCR. L'utilisation de l'ADN ou des technologies à base d'ARN pour l'analyse des microARN peut introduire une incertitude élevée et une faible robustesse car la température de fusion (Tm) du duplex oligonucléotide/microRNA varie considérablement en fonction de la teneur en GC.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR en temps réel

C'est le coté quantitatif. Autre avantage, ce signal est réversible. en chauffant, on dénature l'ADN double brin et le signal s'effondre. Par ce moyen, on peut connaitre la température de fusion des produits amplifiés.  [...] Commençons par cela. l'image du milieu présente justement l'abondance relative de l'ADN en fonction de la température de fusion. Elle a été obtenue à la FIN du run, une fois que l'amplification est terminée, lorsque l'appareil effectue une rampe de température tout en mesurant le signal.  [...]

[Biologie Moléculaire] Courbes PCR en temps réel

Pour s'assurer de la spécificité de l'amplification, on réalise a la fin des cycles d'amplification une rampe de température qui permet de déterminer le point de fusion des produits formés. Pour cela, on fait passer la température de 55 à 85° par petits intervalles tout en mesurant la fluorescence.  [...] Comme la fluorescence disparait quand l'ADN est dénaturé, lorsque l'on atteint la température de fusion de notre produit, il ya une grosse chute de l'intensité de fluorescence. On représente ça sous forme de vitesse de disparition de la fluorescence en fonction de la température, comme en C ou D.  [...]

[Biologie Moléculaire] qPCR

La courbe de fusion représente la décroissance de fluorescence de l'agent intercalant donc la quantité d'ADN double brin en fonction de la température que l'on fait augmenter (l'ADN double brin se dénature de plus en plus).  [...] ensuite en calculant la dérivée (-dF/dT), tu obtiens des pics de fusion ou chaque pic correspond à la température de fusion d'une population d'amplicons présents à la fin de ta PCR.  [...]

[Génétique] Enzymes ADN Polymérase

est écrit La température remonte à 72°C, température a laquelle l'enzyme ADN polymérase fonctionne le mieux. J'ai beau chercher sur internet, je ne trouve pas d'explication à ce phénomène.  [...] C'est à dire que c'est la température idéale de fonctionnement de la polymérase (température a laquelle elle exerce son activité de polymérisation des nucléotides).  [...]

Dénaturation de l'ADN

La chaleur ne permet que de rompre les liasons faibles (ioniques, interactions hydrophobes, liaisons hydrogenes...). Elle ne peux pas ionisé (sauf temperature extreme...), donc rompre des liaisons covalente (dans la plupart des cas...si il y a un effet mesomère, il se peut qu'une forme ionisé de la molécule en question se forme).  [...] Les histones sont liés a l'adn il me semble par des liaisons ioniques et hydrogene, mais elle sont nombreuses (les liasons) donc les interactions diminueront mais il faudra un temperature importante pour les disociés totalement. (je ne suis plus tout a fait sur de la facon dont les histones se lient à l'adn donc j'ai peut etre faux sur ce dernier point).  [...]

[Biochimie] les variations de la température en fonction de l'altitude.

[Biochimie] les variations de la température en fonction de l'altitude.  [...] J'ai une question, et je ne trouve pas ma réponse. Le température varie en fonction de l'altitude (un coup elle monte, après elle descend...) comment on peut expliquer que la température varie comme ça.  [...]

Question sur les phages

Je voudrai trouver des manipulations en fonction de la température et du pH.  [...] je voudrais trouver des manipulations avec les phages en fonction de la température.  [...]

[Biochimie] Conservation ADN à température ambiante

J'ai fait une énorme boulette et ai laissé mon ADN à température ambiante pendant 4jours.  [...] Sachant qu'il ne fait pas très chaud ces derniers jours, je voulais savoir s'il était possible que mon ADN ne soit pas complètement foutu.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage par PCR taille des amorces

En général les oligos font 20-30pb et on essaye d'avoir un ratio équilibré entre les G+C et les A+T (dans ces conditions, une PCR aux température d'hybdridation classiques 51-58°C doit fonctionner). La restriction coupe ton ADN proprement, pas besoin d'ajouter des bases pour protéger ta séquence codante.  [...] Ce que je fait en général, c'est de cloner la séquence amplifié avec la présence des sites de restriction dans un vecteur de clonage pour fragment PCR. Ceci permet d'avoir des morceau d'ADN de part et d'autre des sites de restriction. Je clone ensuite le fragment dans mon vecteur d'expression.  [...]