• Forum - ADN, Extrémités, Séquences

[Génétique] Saut sur le chromosome

De ce que j'en comprend, on design des amorces chargées de recouvrir de longues séquences répétitives sur le morceau d'ADN circularisé. Reste plus qu'à effecture un arpentage (et non une marche ) de séquence/chromosome à partir des zones libres.  [...] On doit couper notre ADN pour obtenir des séquences pas trop petites, et on sélectionne celles d'environ 100kb (électrophorèse). On supprime la partie centrale de ces segments puis on clone ensuite les extrémités de ce segment via un plasmide qui contient un gène suppresseur (VS les extrémités non recollées).  [...]

[Génétique] Notion d'insert et de vecteur

Donc voila on me parle d'enzyme de restriction coupant l'adn celon des sequences, de vecteur, et d'un insert qui correspondrait a une sequence de nucleotide en rapport avec la coupure enzymatique... et je ne comprend pas vraiment cette histoire de insert.  [...] En générant les même extrémités au niveau de l'insert, celui ci pourra s'apparier avec les extrémités du vecteur car si tu remarques ce sont des séquences dites palindromiques. la moitié 5' de la séquence est complémentaire de la moitié 3'. Une fois collé, on reconstitue un fragment d'ADN circulaire avec l'insert inséré.  [...]

Structure d'un phage

Le phage possède bien un ADN double brin linéaire et ses extrémités sont les séquences COS (séquences cohésives d'ADN simple brin qui font 12 bases). L'ADN du phage peut donc se circulariser grâce aux COS. On peut empaqueter in vitro de l'ADN exogène dans l'ADN phagique tout en conservant les régions COS, le phage encapside par reconnaissance des régions COS puis après infection sur des bactéries l'ADN se re-circularise dans son cytoplasme.  [...] Les sites COS sont de l'ADN, ce sont les deux extrémités simple brin de génome phagique. Et le génome est dans la capside.  [...]

Telomere et telomerase

Ils permettent de protéger notre adn car a chaque division cellulaire quelques acides aminés aux extrémités de nos chromosomes sont perdu.  [...] Il y a une grosse erreur pour commencer. Les télomères sont bien des séquences répétitives non codantes mais elles ne sont pas composées d'acides aminés. Ce sont des séquences d'ADN puisque localisées aux extrémités des chromosomes, ce sont des séquences de désoxyribonucléotides (une base azotée, un sucre le désoxyribose ici et un phosphate pour donner le nucléotide complet).  [...]

activité endonucléasique

Bonjour, qu'est ce qu'un complexe enzymatique avec activité endonucléasique merci de m'éclaircir.   [...] quel type de complexe. Une endonucléase est un enzyme qui coupe les acides nucléiques (ADN ou ARN) au sein même de la molécule (alors que les exo c'est à partir des extrémités). Tu as notamment des endonucléases de restriction qui elles reconnaissent des séquences spécifiques.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Voilà, je n'ai pas compris la correction d'un TD à propos de la PCR. Par le fait que l'on utilise des amorces oligonucléotidiques de synthèse, il est possible d'ajouter des séquences dans la région 5' de chaque amorce. Par exemple, un site de restriction aux 2 extrémités du fragment d'ADN synthétisé permettrons ultérieurement d'assembler le produit PCR dans un plasmide.  [...] Je ne comprend pas vraiment...une sonde est complémentaire et antiparallèle de la séquence à étudier donc comment rajouter une séquence à l'extrémité 5' Celle-ci ne s'hybride pas Et puis une enzyme de restriction ne coupe que sur un ADN double brin donc je ne vois vraiment pas comment tout cel s'organise.  [...]

[Divers] Jeunesse éternelle

Comme la fait remarqué pixi, tu dois surement confondre. J'ai déjà entendu parler que les télomères (l'extrémité des chromosomes) représentent l'horloge interne de la cellule et qu'ils se raccourcissent un peu plus à chaque division cellulaire, c'est même l'une des particularité des cellules cancéreuses (immortalité) qui grâce à telomerase peuvent reconstruire ces extrémités, si mes souvenirs sont bons et si je ne me trompe pas.  [...] Les télomères résolvent le problème de la réplication de l'ADN linéaire. Aucune polymérase ne peut combler le trou après la dégradation de l'amorce d'ARN. Chez les eucaryotes, ce problème est résolu par les extrémités télomériques riches en T et en A. La longueur de ces séquences peut varier dans le temps et les extrémités télomériques sont fabriquées par la télomérase qui, si je me souviens bien, comprend 2 parties.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment séquencer un génome inconnu ?

J'ai pensé pour séquencer d'extraire l'ADN de l'organisme puis de digérer celui-ci avec des enzymes de restrictions. J'obtiens ainsi différents fragments dont les quelques nucléotides aux extrémités sont connus grâce aux sites de restrictions. Est-il possible alors d'y hybrider de façon spécifiques des sondes pour permettre un séquençage avec la méthode de Sanger par exemple (car les sondes sont plutôt longue par rapport aux sites de restriction non ).  [...] De nos jours, on ferait du séquençage haut débit. fragmentation de l'ADN et ajout d'adaptateurs connus aux extrémités pour faire en parallèle des millions de reads qui peuvent être alignés entre eux par chevauchement (contigs).  [...]

[Biochimie] Empreinte à la DNase+ TAMOXIFENE

Si on place une protéine dans le milieu avant digestion et que celle-ci se fixe sur une séquence d'ADN, on observera disparition de certaines bandes. comme l'ADN n'est marqué qu'aux extrémités, on peut savoir grossièrement où la protéine s'est fixée.  [...] Sans tamoxifène, la protéine de fusion cre-dllER est séquestrée dans le cytoplasme par des chaperonnes (HSP70). Lorsque l'on ajoute le tamoxifène, le DLL change de conformation, libère les chaperonnes et la protéine de fusion peut entrer dans le noyau et exciser la portion d'ADN comprise entre les séquences LoxP.  [...]

Demande d'aide pour un exercice

Les ligases catalysent les liaisons phosphodiesters entre les nucléotides de fragments complémentaires. Leur action peut donc aboutir à la circularisation des fragments d'ADN dont les extrémités sont complémentaires. L'étude de ce processus de circularisation pourrait-elle préciser les caractéristiques de la double hélice d'ADN en solution.  [...] Pour répondre à cette question, une séquence connue d'ADN double brin a été fragmentée par des endonucléases. Les extrémités des nouveaux fragments formés sont dites cohésives, c'est à dire complémentaires.  [...]