• Forum - ADN, Enzyme, Restriction

Doc / bouquin cours [Bio Mol]

-. modification enzymatique de l'adn (adn polymérase enzyme restriction...).  [...] Sinon, pour mieux comprendre mes cours, je fouinais dans les bouquins de BM de chez Dunod qui sont pas mal. Je ne me rappelle malheureusement pas des titres exacts, mais c'est toujours Biologie Moléculaire de toute façon lol.   [...]

Enzymes de restriction

C'est l'emplacement de la méthylation qui change d'une espèce à l'autre et qui permet à l'enzyme de restriction de reconnaître l'ADN de la bactérie qui la (. -l'enzyme de restriction) synthétise.  [...] Je n'ai pas la réponse mais j'ai fouillé un peu...rien trouvé. Mais après un petit ctrl+F [GGATCC] sur le génome de Bacillus amyloliquefaciens, chez qui on a trouvé l'enzyme de restriction Bamh1, laquelle est insensible à la méthylaton, on remarque que le site cible n'est présent que deux fois son génome.  [...]

[Biologie Moléculaire] Manque de fiabilité crible Blanc-Bleu

J'ai compris le principe théorique de ce crible mais j'ai entendu dire qu'il y avait quand même un manque de fiabilité non-négligeable avec des faux-positifs et faux-négatifs.   [...] De manière identique, l'enzyme de restriction peut aussi abimer l'extrémité de l'ADN.  [...]

microbiologie (sens anti-sens)

tu définis si c'est sens ou anti-sens selon la longueur des segment d'ADN (traité pas l'enzyme de restriction).  [...] Par convention les brins d'ADN sont toujours écrit de gauche à droite du 5' vers le 3' (sens), l'anti-sens étant donc l'opposé 3' vers 5'.  [...]

[biologie moléculaire] Southern blot

pardon je fait des essai sur des bacteries. Donc je digere l'adn génomique avec une enzyme de restriction. Je fait migrer sur agarose et je transfert.  [...] Etant donné que j'essayé de trouver les conditions optimal de ma sonde je travail sur un adn connu. J'ai donc choisi mon enzyme de restriction de facon a ce qu'elle ne coupe pas mon gene. En plus j'ai 3 copie du genes qui sont legerement differente... Vous comprenez pourquoi je suis autant desespéré.  [...]

PCR (amplification génique)

Par exemple pour la PCR RFLP, on met une enzyme de restriction, et on fait mirgrer ce que l'on obtient par électrophorèse. Mais s'il n'y a que très peu d'ADN, on ne verra rien après la migration.  [...] Souvent en biologie on est limité par la quantité de matériel biologique. La PCR est donc une méthode géniale et puissante puisque l'amplification est exponentielle. En plus les cycles de PCR sont relativement courts (environ 3 minutes il me semble) ce qui fait gagner beaucoup de temps par rapport à une amplification sur culture de bactéries transformées (beaucoup moins d'étapes aussi).   [...]

[Biologie Moléculaire] Erreur de taille sur SDS-PAGE

Deuxièmement je voudrais savoir si il fallait un distance minimum de part et d'autre d'un site de restriction pour que l'enzyme clive le double brin d'ADN. Là aussi je précise mon idée. J'ai un site de restriction qui se trouve 71pb avant la fin du fragment d'ADN et je voudrais savoir si c'est possible que l'enzyme ne le vois pas.  [...] Pour le SDS je ne sais pas.Mais pour la restriction, il ne devrait pas y avoir de problème.On peut bien creer des fragment PCR avec juste un site de clivage de chaque coté et les cliver ensuite.Je sais pas si mon exemple et très clair, mais toujours est-il que je suis quasi sur que ça ne posera pas de problème.  [...]

[bio mol] hélicase

moi je pensais sinon fabriquer un ADN double brin linéaire. contenant non loint de l'origine de replication un site de reconnaissance d'une enzyme de restriction.  [...] l'experience consiste a mettre l'hélicase et l'enzyme de restriction et on ne devrait plus avoir qu'une bande (car l'enzyme ne peut pas coupé de facon simple brin).  [...]

[Biologie Cellulaire] enzyme de restriction

j'ai du mal à comprendre une notion de mon cours malgré les explications de ma prof. pourquoi l'ADN du plasmide et celui de l'organisme dont on veut cloner le géne sont-ils découpés avec la même enzyme de restriction.  [...] ce n'est pas qu'une question de quantité... mais imagine ce que tu vas avoir si tu coupes ton ADNg par une enzyme de restriction genre EcoRI.  [...]

Sequence 5' pour un ADNc en Southern Blot

Lors de l'etude de la plus frequente maladie hereditaire, l'hemochromatose, on remarque que la pathologie est du au gene HFE. On effectue alors un southern Blot sur l'ADNc et l'ADN genomique, expression du gene. Ils sont digeres par l'enzyme de restriction Hind III. Voila les resultats que l'on obtient.  [...] Le probleme reside sur le fait qu'il ya un detection d'exon dans la region 5' UTR, ce qui pourrait correspondre au premier exon mais je n'en suis pas sur.   [...]