• Forum - ADN, Enzyme, Concentration

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

J'utilise 1 microlitre (80ng/microlitre) de template ADN du coup comme ils précisent pas grand chose d'autre peut être que c'est trop pour un volume total de 25, mais comme pour 100 ils disent jusqu'à 20... sans préciser de concentration.  [...] Mais comme je disais ils restent assez vague sur les quantité, (1-20 microlitre d'ADN sans indication sur la concentration optimal pour le fonctionnement de l'enzyme, pareil pour l'enzyme, 0.2-0.5...), et le fait est que dans les articles que j'ai pu lire, ils disent.  [...]

[Biologie Moléculaire] travaux pratiques, isolation plasmide

On rajoute un volume suffisant d'éthanol concentré pour obtenir une concentration finale à environ 70%. On centrifuge alors pour faire tomber l'ADN au fond du tube, on enlève le surnageant et on mets ensuite de l'éthanol à 70% directement, car il n'y a plus de solution aqueuse pour diluer l'éthanol.  [...] 1 µL d'enzyme ça ne veut pas dire grand chose... Il faudrait connaître la concentration de PstI et elle est écrite sur le tube normalement. La concentration des enzymes de restriction est souvent de 10 ou 20 (parfois 50) U/µL. U est l'abréviation pour unité (d'enzyme) et par définition, une unité permet de digérer 1 µg d'ADN en 1 heure à 37°C et dans un volume final de 50 µL.  [...]

confirmation pour un petit calcul

J'aurais besoin d'une petite confirmation pour un calcul car je ne suis pas sûre du résultat même si ça paraît tout bête. Voilà je voudrais 5Unités d'enzymes dans un mix de 20ul. J'ai rajouté dans le mix 5ug d'ADN sachant qu'il faut 1Unité d'enzyme pour 1ug d'ADN et que la concentration de l'enzyme est de 5 000Unités/ml.  [...] Normalement je devrais déposer 1ul d'enzyme dans monmix car 5unités / 5000Unités = 1ul non.  [...]

[Microbiologie] Lyse efficace de Candida

Je suis à la recherche d'une méthode de lyse pour les Candida. J'ai déjà essayé plusieurs méthodes. lyse mécanique, avec enzyme, détergents... Mais rien n'est assez efficace. Il ya toujours une certaine lyse sur une très forte concentration de bactéries, mais je cherche une méthode qui serait super efficace pour récupérer le plus d'ADN possible.  [...] J'avais fait des essais comparés pour lyser des bactéries rapidement avec la meilleure efficacité possible et j'avais le meilleur rendement avec une lyse mécanique avec des billes. L'appareil utilisé était un minibeadbeater = un look est allemand, si vous pr évenez pas vos collègues, ils vont croire que le batiment s'effondre mais très efficace.   [...]

[Biochimie] Mapping et Bal 31

This degradation is accomplished without the introduction of detectable scissions away from the ends of the duplexes. When this nuclease is used to produce a series of progressively shortened samples from a linear duplex DNA, subsequent digestion of these samples with a site-specific restriction endonuclease and analysis of the resulting fragments by gel electrophoresis permits the rapid establishment of the order of the restriction enzyme fragments through the entire genome.  [...] En fait encore une question. Comment trouver la concentration adequate de l'enzyme sachant que je que Bal 31 coupe 750 bp par minute et que j'ai une concentration d'ADN de 2microgrammes par microlitre. Desole mais j'arrive vraiment pas a trouver des infos utiles.  [...]

petite question

Lorsqu'on donne comme titre à un graphique. Concentration en dioxygène au cours du temps avant et après injection d'enzyme dans 3 solutions sucrées.  [...] Donc dans ta courbe Concentration en dioxygène au cours du temps avant et après injection d'enzyme dans 3 solutions sucrées.  [...]

Enzymologie - vitesse de réaction

J'aimerais savoir quelle est la formule ou la relation qui permet de trouver un vitesse de réaction sachant que l'on connait la Km de l'enzyme, la concentration de cette enzyme ainsi que la concentration de substrat... je suis totalement perdu j'ai vraiment besoin d'aide.  [...] Km de l'enzyme = 3¼M - concentration de cette enzyme = 0.1mg/ml - concentration en substrat = 600¼M. La vitesse de réaction = 30¼M/min.  [...]

[Biochimie] cinétique enzymatique

1. influence de la concentration en enzyme. j'ai tracé la courbe P=f(t) pour chaque concentration, j'ai dédui des courbes les vi (tangente à l'origine c'est bien cela ) et j'ai tracé la courbe vi = f(Ce) que j'ai aussi interprété.  [...] a) On veut déterminer l'influence de la concentration en enzyme sur la vitesse de la réaction. on ajoute à un mélange comprenant 1 ml de tampon pH 7,0 et 1 ml de substrat à concentration saturante, 1ml de solution d'invertase pure de concentration variable.  [...]

Calcul de Concentration en enzymologie

Je travaille actuellement sur un exercice d'enzymologie, et honteusement je bloque sur le calcul de concentration d'enzyme et substrat.  [...] Le substrat (PM=223) est dissous en acétronitrile à la concentration de 3.4mM. Coefficient d'extinction molaire du substrat =18300M-1cm-1.  [...]

[biochimie] activité spécifique d'un enzyme selon la concentration

J'aimerais qu'on me confirme si j'ai raison ou non de croire que l'activité spécifique d'une enzyme ne varie pas avec la concentration d'enzyme.  [...] Alors pour répondre à ta question. ça dépend ce que tu veux dire par concentration d'enzyme. Si c'est une concentration de l'enzyme spécifique dont l'activité est ce que tu mesures alors tu as raison.ça ne changera pas. Tu as un rapport mol/mg qui est fixe.  [...]