• Forum - ADN, Digestion, Génome, Plasmide

[Microbiologie] Carte de restriction

C'est à propos d'une carte de restriction. J'ai vaguement compris ce que c'était grâce à Internet (Bien plus décidé à m'aider que la prof), puisque je n'en ai jamais entendu parler. Mais je n'arrive même pas à comprendre le sujet.   [...] une banque d'ADN génomique correspond à une digestion de l'ensemble du génome de la drosophile qui a été clonée dans ton plasmide.  [...]

[bio mol] Séquencage. RFLP

1/ Dans la méthode de sanger on insert un fragment d'adn mono brin dans un plasmide. dans ce cas la le plasmide est alors monobrin.  [...] Quand le séquencage est en shotgun (séquencage de génomes), une banque d'ADN (ADNc) issue de la digestion statistique de ce fragment est clonée dans un plasmide, un BAC ou un YAC. Des molécules de plasmides (BAC,...) intègrent.  [...]

[L1 BIO] TP Biologie moléculaire

Puis après on décide de faire une carte de restriction,en faisant une digestion enzymatique par l'enzyme de restriction xho1,cette enzyme se trouve de base dans le plasmide recombinant et aussi dans la séquence de l'ADN de la GFP mais pas dans celui de la Dsred.  [...] La digestion te donne des fragments d'ADN. L'electrophorèse les classe selon leur taille. Le résultat du gel d'electrophorèse te donne donc seulement des bandes, chaque bande correspond à des fragments de plasmides d'une taille donnée.  [...]

Question idiote sur le génôme humain

Les médias se sont étendus sur la course au décryptage du génôme humain et si j'ai compris une chose, c'est que le décryptage ne concernait que l'ADN d'une seule personne dupliquée pour chaque laboratoire (d'ailleurs connait-on l'identité de cette personne).  [...] Le génome dans son entièreté est fractionné au hasard pour obtenir des plus petits morceaux. Comme au départ on a plusieurs molécules d'ADN équivalente, on obtient, après digestion, des fragments dont les séquences peuvent se superposer. Le séquençage est donc redondant.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage

J'ai besoin d'aide pour un clonage. Je dois cloner un fragment d'ADN génomique bactérien dans un plasmide. La stratégie choisie est de linéariser le vecteur par digestion enzymatique, de le purifier sur gel, de le déphosphoryler et de faire la ligation avec l'insert.  [...] Et je bloque à cette étape. j'obtiens autant de clones pour mes bactéries transformées par le vecteur linéarisé que par celles transformées par le plasmide natif. J'en ai donc déduit une mauvaise digestion. Or, j'utilise les enzymes Fast Digest de chez Fermentas pour une digestion o/n.  [...]

plamide repris en EDTA et digetion enzymatique

Comme l'EDTA est un chélateur de cations divalents, possible qu'il titre le Mg2+, Ca2+ etc de votre tampon et entraîne l'activité STAR.   [...] J'ai fait un test. j'ai refait une digestion avec le plasmide repris en EDTA mais je n'ai pas mis d'enzyme. Résultat. mon ADN est dégradé par le tampon, je l'ai fait avec les kits de deux fournisseurs. Il ne s'agit donc pas d'activité STAR, car il n'y pas d'enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide ligature

les questions precedentes portent sur la coupure par BgIII d'un fragment d'adn, de la digestion d'un plasmide avec BamH1, et de la sequence obtenue apres ligation au niveau des jonctions vecteur/insert et insert/vecteur. la question est. Ces jonctions peuvent elles etre recoupées par BamH1 et/ou BgIII.  [...] Maintenant la ligation est peut être réalisée en bout franc et donc ne tient pas compte des digestions qui ne servent qu'a définir l'emplacement. Dés lors on ne pourra pas redigérer le plasmide reformé avec les mêmes enzymes.  [...]

[Génétique] Sondes de Southern Blot et complémentation

Les amorces utilisées pour le Southern sont créées à partir d'ADNc par complémentation avec des dNTP marqués par radioactivité pour être visibles en autoradiographie. Si j'effectue le Southern sur un génome complet après digestion enzymatique (et dénaturation) comme le demande la procédure j'effectue le Southern sûr de l'ADN qui n'est donc pas épissé.  [...] Pour ce qui est des sondes réalisées uniquement sur un exon je n'ai jamais entendu parler de ça. Effectivement si elles sont faites à partir d'ADNc elles ne sont formées qu'à partir DES exons de l'ADN mais pas d'un seul. Mais c'est plausible en digérant l'ADNc par des enzymes de restriction pour diviser les exons et créer la sonde à partir de ces exons *libres*.  [...]

Il y a t'il de l'ADN animal dans les excréments humains ?

Sans parler d'intégration de génome d'OGM (animaux, ou végétaux) dans le génome humain, j'imagine qu'il est possible qu'au niveau des intestins le contact avec un certain type d'aliments, puisse altérer l'épithélium et entrainer une transmission de morceaux de gènes OGM (et encore plus chez des personnes avec un appareil digestif malade ).  [...] Après, il faut rajouter les probabilités. Il faut que la bonne séquence d'ADN (dont le gène artificiellement ajouté/modifié pour les OGM) survive sans mutation ni coupure fatale à la digestion. C'est grand un génome, surtout les génomes eucaryotes. Après, il faut que ce morceau d'ADN nu rentre dans une cellule.  [...]

[Biochimie] Preparation et analyse de plasmides

* Dans l'analyse par électrophorèse, tu vois des choses différentes en fonction de la conformation de ton ADN. Ainsi, dans le cas simple où on utilise de l'ADN linéaire (ton plasmide en morceaux après la digestion par les enzymes de restriction), plus c'est bas, plus c'est petit.  [...] donc, avant digestion, on regarde la tête de l'ADN *non digéré* sur gel. Après digestion, on compare. si notre ADN a la même tête, c'est FAIL. si on a des bandes qui correspondent à ce qu'on a calculé d'après les positions des sites de restrictions (les regexp), c'est PASS.  [...]