• Forum - ADN, Concentration, Extraction

Concentrer

Typiquement, pour de l'ADN, il existe des protocoles visant à le faire précipiter, puis après re-suspension dans un volume moins élevé, on obtient une solution plus concentrée.  [...] Généralement un ADN plus concentré est plus facile à manipuler, pour le diluer à la concentration voulue, pour faire des PCR plus efficaces.  [...]

demande d'infos!!! extraction de l'ADN

j'ai pas une question. plutot une demande... je ne sait pas si quelqu'un pourra m'envoyer un document complet concernant l'extraction de l'ADN, avec le principe de chaque étape, pourquoi chloroforme pourquoi phenol.  [...] L'extraction d'ADN est au programme au lycée en seconde, et c'est une manip qui est faite à la fac donc si dans google tu tapes TP extraction ADN tu devrais trouver ce que tu veux.  [...]

Ajuster la concentration d'ADN

Voilà j'ai fais une extraction d'ADN (champignons), après quantification, j'ai obtenu des concetrations différentes. comme j'ai de nombreux marqueurs à faire passer, j'aimerais ajuster mes concentration d'ADN pour ne pas avoir d'empatement lors de la révélation des produits de ma PCR (comme c'est déja arrivé).  [...] Cf est la concentration finale, c'est toi qui dois la fixer. Pour l'ADN, le plus pratique si c'est possible est de fixer à 1gamma, soit 1mg/ml (ou ug/ul, c'est la même chose...). Mais c'est toi qui choisis... Vf est le volume final de la réaction, c'est encore toi qui choisit.  [...]

[Microbiologie] extraction d'ADN

J'ai effectué une extraction d'ADN au phénol chloroforme après je m'aperçois que l'ADN n'est pas pur, autrement dit il y'a des restes des protéines et des lipides j'ai repris l'extraction à partir de phénol qui me permet de se débarrasser des protéines et le chloroforme pour éliminer les lipides, en mettant 2µL SUR GEL D'AGAROSE je n'ai pas obtenu de bande j'ai dilué le culot dans 50µl d'eau que dois je faire dois je prendre 6 µl de l'ADN sur gel ou bien dois je refaire la manipulation je n'ai pas envie de tout refaire je suis pressée mon encadreur m'a demandé de lui donner un compte rendu dans les plus brefs délais.  [...] Mais est-ce que tu as fais un dosage de ton ADN quelle est ta concentration il est possible que tu aies perdu ton ADN en refaisant ton extraction d'ADN.  [...]

Transfection plasmide gateway et faible expression proteique

Je veux transfecter des Hek293T, j'ai essayer différents kit d'extraction du plasmide, vérifié la sequence du vecteur et de ma protéine, verifié la concentration d'ADN, testé plusieurs concentrations... je ne sais pas quoi faire d'autre.  [...] Oui séquence de la protéine est ok dans son intégralité... On essaye en ce moment de couper et lié le bout contenant la mutation... pas vraiment un bon taux de succès mais j'espère que ça marchera.   [...]

Extraction d'ADN parasitaire à partir de milieu de culture

je veux faire l'extraction de l'ADN parasitaire, Trichomonas vaginalis à partir de son milieu de culture. j'ai essayer deux kits, celui de Qiagen et de Invitrogen mais la concentration de l'ADN et toujours trés faible à l'ordre de 10ng.  [...] je sais pas si cette concentration est fiable pour faire un typage./.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb migration ADNg sur gel

L'extraction se fait à l'aide du TriReagent. Pour le dosage (20µL d'ADN + 980µL d'eau stérile dans la cuve du spectro), j'obtiens des valeurs de DO de 0,105 pour prendre l'exemple sur un tube. Ce qui me donne une concentration de 262,5 µg/mL d'ADN. Or je dépose ensuite dans le puit d'un gel d'agarose 0,8% environ 10µL d'ADN+4µL de bleu de charge.  [...] Dans le cadre d'un projet, nous avons extrait de l'ADN d'un sol avec un kit d'extraction puis nous avons amplifier un gène spécifique à l'aide d'une PCR et enfin nous avons fait migrer les produits de PCR sur gel d'agarose avec plusieurs concentrations.  [...]

[Biochimie] Concentration d'un produit PCR

La comparaison de l'intensité des bandes en BEt ou en SYBRSafe donne de bons résultats, à un facteur 2 près... Il faut avoir un standard, n'importe quel plasmide linéarisé dont la concentration est connue fait l'affaire. Il est prudent de faire une gamme de dilution du standard (entre 10ng et 500 ng) pour évaluer plus finement la concentration de l'échantillon.  [...] Cette technique sert surtout à doser la concentration après extraction. C'est souvent ce même ADN qu'ensuite on utilise en PCR, donc on le multiplie de façon exponentielle.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification d'ARN

Je suis en première année de thèse et après mon extraction d'ARN, j'ai une concentration de 8 ng/µL environ, dans un volume final de 11 µL (kit PicoPure de chez Arcturus, après microdissection). Je voudrais amplifier mes ARN car je dois étudier une dizaine de gènes en PCR temps réel, donc je n'aurai pas assez de matériel de départ (car il faut environ 50 ng d'ADN par puits...).  [...] Pour cela j'ai trouvé un kit Ambion. MessageAmp, super mais le truc c'est qu'il est très cher.. 1100 € pour 20 réactions.   [...]

[Biologie Moléculaire] Préparation d'un buffy coat ?!!!

c'est ce que j'ai fait, mais je n'obtiens pas de bonnes concentrations au nanodrop (1000). elles doivent être comprises entre 125 et 250ng/microL or j'obtiens en général 60, 90..... (mais la qualité est bonne. le rapport DO260/DO280 est toujours compris entre 1.7 et 1.9).  [...] J'avais besoin d'aide pour la préparation d'un buffy dans le bur d'obtenir une bonne concentration d'ADN après extraction (comprise entre 25 et 50 microgrammes/200microlittres, ce qui correspond à 125-250nanogrammes/microlittres).  [...]