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[Biologie Moléculaire] Transformation au CaCl2

Correction. pour les bactéries, la méthode permettant l'entrée d'ADN dans la cellule procaryote s'appelle la transformation. La transfection est l'entrée d'ADN dans des cellules eucaryotes par méthode non-virale. Enfin la transduction est l'entrée d'ADN dans les cellules eucaryotes par méthode virale.  [...] L'origine de l'ADN n'importe pas sur ces dénominations. Il s'agit uniquement des méthodes employées pour faire entrer l'ADN dans les cellules.  [...]

[Biologie Cellulaire] Technique "tunnel"/apoptose

Une petite rectification il ne s'agit pas de la méthode tunnel mais tunel qui signifie T erminal deoxynucleotidyl transferase d U TP N ick E nd L abelling. Cette méthode se base sur le fait que les cellules apoptotiques voient leur ADN clivé par des nucléases.  [...] Cette dégradation génère des 3' OH libres qui sont reconnus par la transférase qui va leur ajouter un dUTP biotinylé ou marqué avec un fluorochrome. Après il suffit de visualiser le marquage. plus il y a de marquage plus il y a de cellules apoptotiques.  [...]

marqueurs de sélection

Aucune méthode de transformation n'est efficace à 100%. La proportion de cellules transformées dépasse en effet rarement 1‰. Pour sélectionner les cellules transformées, le fragment d'ADN utilisé doit contenir un gène conférant à ces cellules un avantage sélectif dans certaines conditions de culture.  [...] Si par exemple le marqueur était la production d'un pigment, il n'est même pas certains d'avoir assez de bactérie pour obtenir des colonies de la couleur adéquates si les 1% transformées de l'inoculat sont inhibées par chimiotactisme - auquel cas après croissance on peut très bien tomber à 0,1% ou même 0,001% de cellules transformées au sein de notre culture résultante.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

Bonjour, cette discussion date donc j'espère que quelqu'un lira quand même. J'utilise la méthode au trizol pour extraire mon ADN de cellules lymphocytaires, et je cherche à comprendre exactement de quel manière se déplace l'ADN, l'ARN et les prot à chaque ajout, mais surtout pourquoi (principalement concernant l'ADN et l'ARN puisque ce sont des molécules similaires).  [...] J'ai dû mal m'exprimer, je sais que le trizol ne permet pas de les séparer, mais qu'il lyse seulement les cellules. Au labo dans lequel je suis on m'a pourtant expliqué que le colorant pr ésent dans le trizol était soluble dans les solvant organique, ce qui fait qu'il se retrouve en bas (puisque visuellement j'ai bien une phase organique rose), que l'anneau du milieu représentait l'ADN, et la phase aqueuse en haut regroupait les ARN.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage à l'iodure de propidium pour suivi du cycle cellulaire

Si j'ai bien compris le principe de cette méthode, la perméabilisation des cellules entraîne la sortie des fragments d'ADN de 180 bp, ce qui fait que l'intensité de fluorescence des cellules en apoptose est inférieure à celle des autres cellules (puisque proportionnelle à la quantité d'ADN), d'où l'apparition d'un pic en subG1.  [...] Non c'est tout à fait normal que deux résultats de mort cellulaire obtenus avec deux méthodes différentes ne donnent pas les mêmes proportions de mort. Je ne connais pas la méthode de TMRM. En revanche j'ai déjà fait bleu trypan et marquage IP en parallèle et je peux t'assurer qu'en bleu trypan le pourcentage de mort était de l'ordre de 60% alors qu'en marquage IP la fraction de cellules en subG1 était de 15-20%.  [...]

electroporation

Et enfin, comme pour une électrophorèse sur plaque, l'ADN est une molécule chargée qui migre en fonction du courant en traversant un milieu - le gel d'électrophorèse ou présentement des cellules de levure.  [...] Vu que la perforation dans le cas d'une électroporation n'est pas irréversible il ne me semble pas juste de dire que les ions trouent la membrane plasmique de la cellule, ça doit être plutôt être un échange de charges non Qui craient une affinité notamment de la tête des phospholipides.  [...]

[Biologie Cellulaire] Biolistique

Et j'ai juste une question sur la biolistique qui consiste à fixer ces ARN sur des petites billes de metal puis les bombarder sur la cellule pour incorporer les ARN dans la cellule.  [...] Alors si j'ai bien compris la biolistique est une méthode de transfert direct de gène dans une cellule, afin de créer des organismes transgéniques (donc OGM). C'est la méthode de transfert direct la plus utilisée pour transformer des cellules végétales. Elle consiste à propulser le gène d'intérêt dans les cellules à l'aide d'un canon à ADN, ce qui modifiera l'ADN des cellules.  [...]

ADN nu

nous travaillons sur la therapie genique. une methode de transfert utilise l'ADN nu, dans un document que nous avons trouve datant de 2001, il est marque qu'il pouvait s'integrer dans les cellules par des mécanismes inconnus. Est-ce que depuis les chercheurs ont trouve les mécanismes à l'origine de ce phenomene.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Clairement cette méthode artisanale ne permet pas d'obtenir de l'ADN pur même avec une centrifugeuse, puisque l'ADN est déjà précipité, il ira se mettre au fond du tube avec les débris cellulaire. En fait pour ne conserver que l'ADN, il faut centrifuger le mélange avant d'ajouter l'alcool afin d'éliminer les débris de cellules, puis récupérer le surnageant et faire précipiter l'ADN.  [...] Cependant, les méthodes d'aujourd'hui permettent (parfois) de sauter l'étape d'extraction de l'ADN. On passe directement à l'étape de PCR, où les cellules sont lysées et l'ADN libéré lors de la première étape. On peut donc diminuer ce temps à 6H (voir même à 4H en étant -très- pressé).  [...]

[Biologie Cellulaire] Cycle cellulaire

moi ce que je veux savoir c toutes les methodes qu'on peux utiliser pour etudier un cycle cellulaire d'une cellule dés la transition G0/G1 jusqu'a avoir 2 cellules filles en passant par les defferantes etapes connues du cycle.  [...] parmis les methodes les plus importantes dans l'etude du cycle en trouve la cytometrie en flux qui est utilisée pour la quantification du pourcentage des cellules en phase s.comment.  [...]