• Forum - ADN, Bande, Quantité

[Biologie Moléculaire] Déterminer la masse d'ADN dans une bande après électrophorèse

Ensuite il y a une extrapolation à faire pour déterminer combien il y a d'ADN dans la bande de marqueur à partir de la quantité de marqueur déposée dans le puits.  [...] Sur le principe je ne pense pas avoir compris de travers, c'est surtout sur la determination de la quantité d'ADN dans chaque bande du marqueur qu'il y a quelque chose qui m'échappe. J'essaie de faire logiquement mais à chaque méthode personnelle je trouve un truc différent au bout.  [...]

[Biologie Moléculaire] problèmes de PCR , à l' aide!!!

voila j'ai des ennuis avec mes extraits d' adn d' insecte. après PCR l'électrophorèse sur gel ne montre aucune bande.j'ai quantifié au spectrophotomètre et la quantité d' adn varie de 10 à 30 nanogrammes/µl, le rapport 260/280 est bonne pour la plupart, mais ne donnent pas de résultat après PCR.  [...] des fois aussi j'obtiens deux bandes pour un seul puits don la deuxième (qui ne doit pas exister normalement) est non spécifique. la vraie devrait se trouver à 710pb et la non spécifique se trouve à peu près soit à 200 ou 300pb.  [...]

[Biochimie] Concentration d'un produit PCR

On peut avoir une concentration à partir de la bande du produit PCR uhuh dire qu'on m'a toujours répété que la PCR n'était pas quantitative... Je pense que ça doit être loin d'être précis la lecture de l'intensité de la bande... le BET ne se fixe pas de la même façon sur tous les produits.  [...] Oui on peut doser à partir d'un gel d'électrophorèse, en faisant des comparaisons de fluorescence (en gros on sélectionne une bande témoin ou on lui dit il y a tant et il peut estimer la quantité d'ADN dans notre bande). Après c'est un jeu. il faut bien sélectionner sa bande, avoir un gel propre, etc... Et la précision n'est pas super.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme purification sur gel d'agarose

Tout d'abord la quantite d'ADN dans ma bande est autour de 1 micrograme ce qui elimine toute possibilite de surcharge de la colone (dont la limite est 10 microg).  [...] Ce qui a été le plus efficace c'est de rajouter du NaoAc en grande quantité. En effet, le pH du TBE était trop élevé du coup la perte était maximale. Le mieux que j'ai obtenu a été de mettre 15µl de NaoAc pour 100mg de gel coupé.  [...]

[Biologie Moléculaire] le gel idéal??

Sinon en ce qui concerne la bande que tu vois en bas, je ne pense vraiment pas que ce soit de l'ARN pour plusieurs raisons. Pour visualiser des ARN, il faut faire un gel RNAse free, si tu fais un gel classique, il y a de grandes chances qu'ils soient dégradés.  [...] Ensuite, pour visualiser des ARN, il faut en mettre une quantité relativement importante et troisièmement, si tu voyais des ARN en bas, tu en verais aussi en haut qui représenteraient les ARN 18s par exemple. Or ici on ne voit qu'une faible bande en haut et un petit paté en bas qui selon moi n'est rien autre que des ADN un peu degradé, d'ailleurs, on peut voir un léger smear sur ton gel.  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification d'ADN

Tu as deux variables possibles, le niveau de migration et l'intensité de la bande, et je crois que tu n'es pas sure de ce à quoi elles correspondent, non.  [...] oui mais est il possible de quantifier la purification (en terme de chiffres) à partir d'une sipmle difference de fluortescence.  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux bandes en PCR

Ceci dit la quantité de plasmide ne me semble pas etre la cause du soucis, vu que les trois premieres pistes ne contiennent que de l'ADNg si j'ai bien compris. Et la bande d'amplification est tres forte aussi.  [...] Effectivement j'ai négligé l'ADN génomique. Donc non c'est pas la quantité de plasmide. Cependant je maintiens que ça n'est pas deux bandes mais un dédoublement d'une seule bande du fait de la masse d'ADN que vous avez produit. Ca arrive, c'est rien.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR avec augmentation de la T°C d'hybridation?

Je lui demanderai tout à l'heure quand il viendra. Je sais qu'on utilise un ladder où la bande à 1,6 kb contient 66 ng d'ADN pour 10 ul déposés. Du coup, ça te permet d'estimer la quantité de ce que tu as dans la bande et de là, le rendement après purif.  [...] Je suis quand même assez étonnée de voir une bande de très forte intensité avec GC et rien du tout avec HF (même quantité de Mg 2+ ). Une idée du pourquoi.  [...]

[Biochimie] La Replication de l'ADN durant l'Interphase

On remarque que la bande d'un cycle cellulaire se divise en deux pour former un temps en deux cycles. Donc ce serait l'hypothèse semi-conservatif avec les deux brins de l'ADN qui se séparents et servent de modèles pour former de nouveaux brins complémentaires.  [...] - Après le temps de deux cycles cellulaires, la bande d'ADN c'est divisé en deux. une bande de densitée égale à 1.710, et une autre bande de densitée égale à 1.717. on observe donc la présence d'ADN hybride et léger, l'ADN lourd à disparu.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

On a fait amplifier de l'ADN de certains de nos échantillons et on faisant migrer les produits sur gel, il s'est avéré que y a eu contamination (révélation d'une bande sur gel correspondant au contrôle négatif).  [...] Aucune bande qui pourrait montrer une certaine amplificationd'un fragment d'ADN. par contre tout en bas du gel et au niveau de tous les tubes y a une bande de la même taille et même intensité (paraît comme s'il s'agissait de fragments d'ADN dégénérés...) et qui correspond à la plus petite bande du marqueur et qui est située aussi tt en bas.  [...]