• Forum - ADN, Bande, ARN

[Biologie Moléculaire] pb dosage ARNtotal spectro

J'ai fait ensuite un gel pour vérifier l'absence d'ARN suggérée par les dosages au spectro. Et pourtant, j'ai bien de l'ARN dans mes échantillons...Il faut cependant que je puisse doser mes ARN car après je fais un traitement DNase (but = qPCR, et mes amorces se fixent aussi bien sur l'ADN que sur l'ARN.  [...] Oui je retrouve de l'ARN...mais je vois peu la bande qui correspond à l'ARN 28S. Je vois bien la bande qui correspond au 18S + smear = ARNm. (il faut dire aussi que je n'ai pas de marqueur de migration d'ARN, du coup je mets comme marqueur du marqueur 1kb ADN double brin alors les tailles les distances de migration de correspondent pas entre mes ARN et le marqueur).  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN contaminé par de l'ADNgénomique

.. j'ai donc lancé une PCR sur mes ARN avec des amorces de l'actine et effectivement une belle bande apparait en electrophorèse.  [...] mon dernier essai a été de purifier l'ARN avec le kit RNeasy + une DNase fournie avec le kit mais toujours une bande après PCR avec les amorces de l'actine.  [...]

[Biologie Moléculaire] le gel idéal??

Le plus bas que j'ai fait c'est 0.4% d'agarose et ça pouvait encore allé, d'où ma remarque sur le 0.2%...C'est vrai que ça fait peu. Déjà si tu fais un 0.6% ce sera mieux en effet. Mais ton but n'est apparemment pas de séparer des fragments d'ADN génomique, c'est plutôt pour voir si ta purif a bien marché, je me trompe Dans ce cas l'important est que ton ADN génomique rentre dans le gel pour vérifier la netteté de la bande, afin de voir s'il n'y a pas de dégradation qui causerait un smear en-dessous.  [...] Mon conseil, fait un gel 0,8 % agarose, grands puits, mets 10 uL d'ADN et laisse bien migrer. Révèlé au BET et si il y a bande aux UV, cela veut dire qu'il y a ADN (ou ARN même si bon...j'ai déjà expliqué.). Si tu ne vois rien, il n'y a pas d'ADN, si il y a un smear, il y a des ADN mais tout dégradés.  [...]

[Microbiologie] Viabilité d'une bactérie et ARN - Page 2

- Le smear d'ADN génomique dégradé masque la bande d'ARN (tout dépend de son intensité dans la condition sans DNase). Tu peux essayer de colorer à l'acridine orange qui colore spécifiquement les ARNs, ainsi ils pourront éventuellement se démarquer du smear si le problème vient de ce point là.  [...] Je suis désolé mais je ne comprends rien au gel. Quelle est l'échelle des marqueurs de taille A combien se situe la bande Les extractions d'ARNs se font-elles dans des conditions où tu surexprimes un gène pour avoir une bande majoritaire comme cela est le cas dans la piste a.  [...]

mise en evidence de l'ADN et l'ARN

Bonsoir, je suis étudiante en médecine et j'ai un exposé sur la mise en évidence de l'ADN et l'ARN et j'ai rien trouver sur le net et je sais même ce que je dois cherché. Svp vous pouvez m'aider et me donné une idée sur sa. Sachant que c'est mon 1er exposé a la fac vue que je suis en 1ere année. Merci.  [...] Pour moi une technique toute bête pour savoir si ce que tu as dans ton tube est de l'ADN ou de l'ARN tu traites soit avec une DNase soit avec une RNase, tu fais migrer sur gel en présence d'un intercalant (BET par exemple). Si la bande persiste après traitement à la RNase tu as de l'ADN et inversement.  [...]

Isoler un ARNm

Bon alors le mieux c'est de lyser les cellules par les méthodes classiques, avec en plus un inhibiteur des RNases. Après tu fais une centri (10000rmp pendant 10-15 minutes) pour enlever les membrane et les organites. Après le mieux est de faire agir une DNase après avoir fait agir un dénaturant de protéines (SDS, beta-mercapto,   [...] ..) qui enlèvera les protéines liées à l'ADN pour mieux le dégrader. Avec ce que tu récupère (ARN plus ou moins purs), tu peux ensuite faire un gel dénaturant puis hybrider une sonde spécifique de l'ARNm que tu veux purifier (Northern). Tu auras donc une seule bande si ta sonde est assez spécifique et que tu n'as pas perdu ton ARNm en cours de route (normalement non ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Sonde antisense pour ISH

J'ai tenté ces derniers jours de faire une sonde ARN. Après l'étape de linéarisation, mon plasmide avait la taille attendue (vérification du gel). J'ai donc lancé la reverse transcription. Après RT je devais obtenir une bande autour de 750bp évidemment je sais qu'avec le ladder ADN on ne peut pas vraiment comparer mais c'est beaucoup plus gros (presque 3kb) que ce qui a été obtenu dans le labo précédemment.  [...] Y a t-il une chance que ma sonde soit quand même correct Sinon à quoi pourrait correspondre ma bande sachant que le plasmide avec l'insert fait 5.5kb.  [...]

[Biochimie] La Replication de l'ADN durant l'Interphase

On remarque que la bande d'un cycle cellulaire se divise en deux pour former un temps en deux cycles. Donc ce serait l'hypothèse semi-conservatif avec les deux brins de l'ADN qui se séparents et servent de modèles pour former de nouveaux brins complémentaires.  [...] - Après le temps de deux cycles cellulaires, la bande d'ADN c'est divisé en deux. une bande de densitée égale à 1.710, et une autre bande de densitée égale à 1.717. on observe donc la présence d'ADN hybride et léger, l'ADN lourd à disparu.  [...]

[Biotechnologie] L'ADN mystère !!!

après une PCR pr amplifier le gène codant pr l'ARN 16S chez P. fluorescens nous avons eu sur l'électrophorèse une bande de très forte intensité pour le témoin NEGATIF (et seulement pour celui-ci) correspondant à la même taille que l'ADN test. Nous avons de suite pensé à une erreur de manipulation.  [...] s'il s'agissait d'une contamination de l'un des réactifs, on aurait cette même bande pr ts les autres puits, ce ki n'est pas le cas, celles des échantillons étant largemt + faibles. Et s'il sagissait d'une contamination entre tubes test et tube témoin, l'intensité aurait été plus faible ou au pire identik à celles des tubes test.  [...]

[Biologie Moléculaire] Déterminer la masse d'ADN dans une bande après électrophorèse

Ensuite il y a une extrapolation à faire pour déterminer combien il y a d'ADN dans la bande de marqueur à partir de la quantité de marqueur déposée dans le puits.  [...] La question en elle-même est donc. comment faire pour déterminer la quantité d'ADn présente dans chaque bande du marqueur PM.  [...]