• Forum - ADN, ARN, étape, Protocole, Précipitation

[Biologie Moléculaire] Rôle du PEG dans l'extraction

Je fais des co-extractions ADN/ARN et la dernière étape de mon protocole est une précipitation au PEG 6000 (Polyéthylène glycol) pendant 2h à température ambiente.  [...] Ce qui m'intéresserait aussi, c'est de pouvoir baisser la température lors de la précipitation. C'est à dire au lieu de laisser les échantillons à T°C amb pendant 2h, de les laisser plutôt à 4°C même si le temps s'allonge. Pensez-vous que l'effet sera le même.  [...]

[Biologie Moléculaire] protocole extraction ARN (pas de kit, ni trizol)

Essaye un protocole d'extraction d'ADN classique, lyse avec un détergeant, puis précipitation a l'alcool. Si tu manipules proprement alors tu auras de l'ADN et de l'ARN.  [...] Dans le molecular cloning, il y a un protocole pour des extractions d'ARN a base de thiocyanate de guanidine et phénol. Un genre de trizol maison quoi.  [...]

[Biologie Moléculaire] le gel idéal??

Je ne sais pas ce que tu veux faire avec ton ADN, mais si tu le quantifies A 260 il faut d'abord que tu degrades l'ARN et que tu repurifies l'ADN, sinon ta concentration va etre plus que fausse. Generalement dans les extractions old school il y a une etape de traitement a la RNase avant la precipitation.  [...] Exact LXR tu as bien deviné, mon véritable soucis c'était plutôt de tester la justesse de mon protocole,surtout que je ne voulais pas travailler avec le kit. j'aime bien maitriser toutes les étapes pour comprendre le déroulement des choses. j'ai donc opté pour le 0,6%.  [...]

[Biologie Moléculaire] lors de la purification de l'ADN plasmidique

je voudrais savoir est ce que le phenol-chloroforme appartient au étapes de la purification de l'ADN ou la précipitation de ceci par l'éthanol reste la dernière étape de la purification.  [...] je ne suis pas certains d'avoir compris. Si tu fais une lyse alcaline oui il y a une etape de phénol/chlorophorme suivi d'une précipitation de l'ADN.  [...]

inhibiteurs de la qPCR

C'est l'ADN génomique d'un insecte (une mouche gallifère ). L'extraction d'ADN avec le CTAB n' a pas marché donc j'ai suivi le protocole du salting out ( precipitation des débris cellulaires avec le NaCl et lavage avec l'ethanol absolu pus l'ethanol 70).  [...] Svppp je veux une réponse a cette question.. comment est ce que avec une pcr ou une rt pcr on peut savoir s'il ya un cancer ou non autrement dit comment on procède pour analyser un échantillon avc une pc ou une rt pcr je veux comprendre le protocol ps. Chuui tres nulle en ce domaine de la bio mol svp j'aimerai bien que la reponse soit très claire et merci d'avance.  [...]

[Biologie Moléculaire] Preparation BAC

J'ai d'abord utilise un kit PureLink Quick plasmid miniprep de chez invitrogen dont le protocole repose sur une lise alkaline suivi d'une etape de purif sur colonne par centrifugation.  [...] En regardant sur le net, j'ai trouve un protocole (venant du site de CHORI) ou ils ne faisaient qu'une lyse alkaline suivie d'une precipitation a l'isopropanol et d'un lavage a l'ethanol (donc pas de colone ici). Je viens de suivre ce protocole et la quantite d'ADN recupere me semble suspecte (6microg par microL.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

En revanche, pour l'extraction d'ADN avec du phénol basique, c'est pas vraiment clair. Des sites comme http.//www.chups.jussieu.fr/polys/bi...Y.Chp.7.3.html disent que l'ARN et l'ADN sont en phase aqueuse (mais dans ce cas, qu'est ce qui élimine l'arn) mais sinon, implicitement, on pense que l'ARN est dans la phase organique (d'où la purification différentiel des acides nucléiques en fonction du pH).  [...] merci de ces réponses. Une question en entrainant une autre. la méthode classique de purification d'adn est. lyse cellulaire (sds, PK) suivi de phénol/chlo et précipitation alcoolique (isoprop ou ethanol). Nulle part est fait mention d'une étape RNAse, DNAse free. Est ce que.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN

En ce qui concerne l'extraction d'ADN, sous quelle forme on obtient notre ADN vers la fin du protocole d'extraction (precipitation à l'éthanol).Autrement dit, est-ce qu'on est obligé d'obtenir de l'ADN sous forme de pelote ou bien ce n'est pas toujours le cas.  [...] Personnellement j'ai extrait de l'ADN génomique du soja par les méthodes classiques basées sur l'utilisation de détergent (CTAB et SDS ) par deux protocoles différents et dans les deux cas j'ai obtenu un précipité sous forme d'écaille. je n'ai pas compris qu'on est-ce que on obtient une pelote d'ADN et quelle est la relation entre la forme et le degré de contamination de l'ADN.  [...]

[Génétique] Génotypage non invasif

- le premier montre qu'il est possible de génotyper une souris à partir d'une crotte, cela-dit le protocole d'extraction est long et compliqué (2 jours, beaucoup d'étapes).  [...] Sur les fécès je n'ai rien eu, mais je m'y attendais car je n'ai pas fait de précipitation (or il y a pas mal d'inhibiteurs de PCR dans les fécès). En passant par une étape phénol/chloroforme et une précipitation ça devrait aller mais étant donné que le premier protocole est cent fois plus simple je ne vais pas m'amuser à l'essayer.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

Idée un peu simple pour tester l'extraction. hydrolyse complète, puis voir au chlorure d'argent si on aurait une précipitation Ag 3 PO 4.  [...] Merci, La précipitation du phosphate d'argent demontrera juste si il y a de l'ADN/ARN non pour ca je pense que le Nanodrop est plutot efficace, il y a bien de 'lADN dans mon echantillon, mais peut etre qu'il est pollué par autre chose qui empêche la polymerisation, mais ce quelque chose empechera pas l'hydrolyse je pense car c'est quelque chose qui a besoin de beaucoup moins de stabilité que l'action d'une pol.  [...]