• Forum - ADN, ARN, Acétate de sodium

[Biologie Moléculaire] Extraction acides nucléiques totaux

La question que j'ai à poser à la communauté futura science est simple. connaissez-vous une méthodes d'extraction pour les acides nucléiques totaux (extraction ADN + ARN) qui fonctionne chez le végétal.  [...] Merci, je reflechi à la méthode phenol clhoroforme. Tu sais à quel étape sont séparés les ADN de l' ARN Est-ce au moment de l'ajout de l'acetate de sodium.  [...]

extraction d'Adn

je voudrais savoir à quoi cela sert l'étape où l'on ajoute de l' acétate de potassium au broyat de tissu,( pr éalablement incubé à 65°C avec tampon de lyse et proteinase K )et que qu'on laisse incuber dans de la glace.  [...] L'acétate de sodium permet de tamponner la solution, neutraliser les phosphates et cela aide également à la pr écipitation de l'ADN (en ajoutant un alcool comme l'isopropanol).  [...]

TE dans phenol-chloroforme

De plus, si je ne me trompe pas, l'acétate de sodium 50mM pH 5.4 (de tête le pH) est utilisé pour précipiter l'ADN, donc je ne vois pas trop pourquoi combiner phénol et agent précipitant.  [...] salut. oui j'extrait l'ARN du sol. Et apparemment l'acétate de sodium et à pH5 si on fait le tampon avec l'acide acétique, je pense que je vais faire ça, merci beaucoup pour votre reponse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Précipitation et conservation d'ARN

L'eau RNase free pour préparer l'acétate est précieuse et si je commence à douter de la poudre utilisée par des collegues sans gants + pH mètre + HCl pour ajuster le PH à 5,2 j'ai peur de contaminer mon ARN (sachant que l'autoclave ne détruit pas toutes les RNases).  [...] Ma question est donc. vaut-il mieux préparer de l'acétate de sodium avec de l'eau RNase free et ne pas ajuster le pH (au moins pas besoin d'un gros volume necessaire pour immerger la sonde mais le PH est supérieur à 7) ou vaut-il mieux preparer l'acétate avec de l'eau PPi et ajuster le pH puis autoclaver le tout Quelle est la solution la moins pire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN

Je suis entrain d'optimiser une extraction d'ARN chez le chêne Liège. J'ai essayé un kit commercialisé mais la pureté et le rendement en ARN est très faible. J'ai trouvé ds un article un kit maison, il utilise du glycogene pour précipiter l'ARN. Est ce que qlq'1 connaît un autre produit pour substituer le glycogene.  [...] sinon faire un mélange avec methanol-chloroforme (récupérer la phase supérieur) suivi d'un mélange chloroforme (récuperer la phase supérieur) suivi d'une précipitation à l'acetate de sodium et ethanol (0.3M finaux d'acetate de Na, avec 2.5V de ethanol 99%, une heure a -20°, centrifuger récupérer le culot et le laver avec 250 microlitres ethanol 70%, centrifuger evacuer l'ethanol et resuspendre en eau-DEPC ) permet normalement d'avoir une bonne qualité d'ARN sans trop de pertes.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Pour résumer. détruire les cellules (qui ont été lavées dans un tampon) à l'aide d'un détergeant (SDS trouvable dans le commerce), faire une première centrifugation courte pour faire descendre tout les débris cellulaires, prélever le surnageant (où il y a l'ADN et des protéines), puis faire précipiter l'ADN à l'aide d'Ethanol et d'acetate de sodium.  [...] Avant même que l'on commence à séquencer tout ce qui nous tombe sous la main, on était déjà capable de différencier l'ADN d'un individu de celui de plusieurs dizaines de millions d'autres (milliards, aujourd'hui). Grace au mini ou micro-satellite. Ce sont de petites séquences d'ADN répétés un certain nombre de fois.  [...]

demande d'infos!!! extraction de l'ADN

- Après avoir placé le melange contenu cellulaire/phenol, il faut agiter afin que l'ADN puisse se retrouver dans la phase aqueuse que l'on recupère après avoir centrifugé. 2 phases sont visibles. la phase aqueuse au dessus contenant l'ADN, la phase organique contenant l'ARN et l'interphase contenant les protéines.  [...] En bref, il faut precipiter l'ADN avec de l'Acetate de Sodium et de l'Ethanol 70% par agitation puis centrifugation. Il faut eliminer tout l'ethanol puis nettoyer le culot avec de l'Ethanol 100%. Apres une nouvelle centrifugation, l'Ethanol est eliminé et le culot d'ADN seché puis remis en suspension dans un tampon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Isolation d'ARN et élimination de DNase

Je dois extraire de l'ARN de souris sur différents organes. Pour des raisons de budget, j'utiliserai le TRizol et non des colonnes. Je compte déposer mes ARN sur gel pour vérifier la qualité et voir si ils ne sont pas contaminés par de l'ADNg et dans ces cas faire agir de la DNase de chez Qiagen (celle utilisée avec les colonnes RNeasy par exemple) car il m'en reste pas mal.  [...] Par contre, vu que je n'ai plus de colonnes, je ne pourrai pas faire un clean-up. Dois-je laisser la DNase ou puis m'en débarrasser autrement comme par la pr écipitation de l'arn avec de l éthanol et de l'acétate de sodium. Sachant enfin que je perds en rendement à chaque pr écipitation et que certains de mes organes sont très petits.  [...]

[Génétique] Electrophorèse d'un plasmide avec 5 bandes

Tu dénatures le plasmide et normalement il se renature quand tu passes en acétate de potassium. Du coup là tu peux avoir du simple brin qui apparait et c'est vite fait. Un peu trop longtemps dans une sauce, pas assez dans l'autre et hop t'en récupères.  [...] Je ne comprends pas ta question, peut-être faute de café mais. tu centifugies tout ton tube avec l'intégralité de son contenu = différentes espèces d'ADN, donc l'ADN précipite au fond et tu n'enlèves que le surnageant, le culot étant à la fin resuspendu dans du TE ou dans de l'eau.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN

Après avoir extrait les ARN totaux au phénol/chloroform, je les ai précipités directement à l'éthanol 70% au lieu de l'éthanol absolu et mis à -20° toute la nuit. Du coup, la précipitation ne sera pas parfaite.. Comment pourrais-je rattrapper cette bétise Dois je rajouter du PEG, ou de l'acétate de sodium 3M ou du NaCl 3M pour mieux favoriser la précipitation dans l'éthanol 70%.  [...] 1 volume essayez d'ajouter encore un volume d'absolu, ou alors 2 vol d'isopropanol à la limite. Pour l'acétate 3M en principe c'est trop tard.  [...]