• Forum - Activité, Solution, Enzyme

[Génétique] Transcription inverse

Le tampon RT, comme son nom l'indique, est là pour tamponer la solution au pH adapté à l'enzyme. Il contient aussi des sels, nécessaires à son activité.  [...] De plus les ARN sur lesquels on travaille ont déjà été traité avec une DNase dite RNase free (une DNase sans RNase) alors pourquoi on doit encore rajouter une RNase OUT parce qu'on aurait pu contaminer la solution pendant la manip avec des RNases qui trainent un peu partout.  [...]

[Biochimie] Probleme d'unité?

Bonsoir j'aimerai savoir apres un gel filtration et une DEAE sephacel d'une souche GY 8695 je trouve une AS = 850. Est ce que c'est possible Merci d'avance.   [...] Alors l'AS est l'activité specifique qui s'exprime en micromoles par minutes par milligramme d'enzyme. Il s'agit d'un resultat obtenu en tp apres un calcul demandé. J'ai 8 ml d'une solution et j'ai calculer une quantité de proteine de 0.55 mg avec une absorbance A280=0.069 avec pour A280=1-. 1mg.ml.  [...]

La mesure de l’activité enzymatique par spectrophotométrie et sa relation avec l’NAD

Je comprends que lors de l'étude de l'activité enzymatique d'une enzyme, si les substrats et les produits n'ont pas d'absorbance cela implique la mesure de l'absorbance d'un coenzyme impliqué dans la même réaction enzymatique. Mais je n'arrive pas à assimiler le suivant.  [...] Si j'avais bien compris, on utilise 340 nm car à cette longueur d'onde seule l'NADH absorbe alors l'absorbance serait exclusivement proportionnelle à la concentration de NADH dans la solution, tandis que cette concentration d'NADH mesurée serait elle-même proportionnelle à l'activité de l'enzyme. Est-ce correct.  [...]

Dégradation de l'ADN

J'utilise actuellement la DNase I cependant je ne peux utiliser du MgCl2 dans ma solution or le tampon fourni avec l'enzyme et l'enzyme elle-même est activée en présence de MgCl2.  [...] J'ai donc essayé de remplacer le MgCl2 par d'autres activateurs potentiels tels que le MnCl2, le Cl3Co à différents temps d'incubation à 37 °C et en augmentant la quantité de Dnase I (jusqu'à 60 U de dnase / ug d'ADN) mais il reste toujours assez d'ADN dans la solution pour être amplifié par PCR.  [...]

[Biochimie] Calcul de l'activité enzymatique

J'aimerai savoir si il existe des formules pour calculer l'activité enzymatique AE, l'activité catalytique AC, la CAC et la CAE.  [...] Si la v max mesurée est bien une vitesse de réaction (soit la vitesse de disparition du substrat divisée par le coefficient stoechiométrique le plus simple possible de l'équation-bilan).   [...]

alpha amylase

Est-ce quelqu'un peut me dire svp comment préparer 100 ml d'une solution d'alpha amylase à une activité 17400 unités Liquefon/ml, sachant que les données qui se trouve sur le flacon de l'enzyme est.  [...] One Liquefon Unit is the measure of digestion time required to produce a color change with iodine solution indicating a definite stage of dextrinization of starch substrate under specified conditions.  [...]

[biochimie] activité spécifique d'un enzyme selon la concentration

Si tu connais l'activité spécifique d'une enzyme particulière. Tu connais donc 100% de la valeur. Or généralement, l'échantillon n'est jamais pure. Tu comprends donc qu'on peut s'en servir pour mesurer la purification d'un enchantillon d'une enzyme donnée.  [...] Si tu as 50% de l'activité spécifique tu as donc 50% des enzymes qui t'intéresse dans l'échantillon et 50% d'enzymes que tu aimerais t'en débarassser. Le but étant par exemple de mesurer l'indice de purification d'une technique ou tout simplement vérifier qu'on a un échantillon de protéines qui est le plus pur possible pour divers manipulations,études.  [...]

[Biochimie] cinétique enzymatique

a) On veut déterminer l'influence de la concentration en enzyme sur la vitesse de la réaction. on ajoute à un mélange comprenant 1 ml de tampon pH 7,0 et 1 ml de substrat à concentration saturante, 1ml de solution d'invertase pure de concentration variable.  [...] Enfin, désolé avec mes questions, pour déterminer la concentration molaire, dois-je utiliser l'activité spécifique de l'enzyme calculée dans la 1ère partie.  [...]

[Biochimie] enzymologie

je voudrais savoir ce que signifie ce résultat. L'enzyme est lente, rapide a effectuée son activité catalytique.  [...] je ne pensepas que ces résultats seuls permettent de conclure à qqch. La rapidité est svt relative. je ne connais pas les ordres de grandeur de la vitesse de réaction des enzymes mais engénéral, on compare plustot pls solution. substratA + enzymeA, substrat A+ enzyme A+ inhibiteur ou activateur, substrat B + enzyme A.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gamme et témoin BSA

Nous utilisons une gamme étalon de BSA, jusque la aucuns problèmes. Ensuite lors de la mesure de l'activité enzymatique, plusieurs témoins sont utilisés et notamment le témoin où l'on remplace notre enzyme par de la BSA.  [...] la BSA est une protéine tout comme l'enzyme utilisée mais qui n'aura pas d'action (et donc aucune activité car elle et incapable d'hydrolyser le substrat).  [...]