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[Biochimie] Enzymologie principe du test d'activité

L'étude de l'activité d'une enzyme dépend de l'enzyme étudiée. Tu n'étudieras pas l'activité d'une protéase de la même manière qu'une nucléase ou une enyme d'une voie métabolique.  [...] Pour étudier l'activité d'une protéine tyrosine kinase, tu peux suivre la phosphorylation d'une protéine (qui est sensée être son substrat) en regardant l'incorporation de 32 P en utilisant du [³- 32 P]ATP.  [...]

[Biochimie] enzymes et substrat biolux

la GFP c'est encore autre chose. Elle n'a pas d'activité enzymatique contrairement a la ßgal ou luciferase. C'est simplement une protéine fluorescente, c'est à dire qu'elle émet des photons lorsqu'on l'excite a une longueur d'onde particulière. Elle n'utilise pas de substrat au sens chimique.  [...] Il m'est arrivé de mesurer l'activité beta-galactosidase avec un luminomètre. Dans ce cas là, le substrat employé ne doit pas être du X-Gal comme il est coutume d'employer pour des tests de sous-clonage, mais un substrat luminescent.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gamme et témoin BSA

la BSA est une protéine tout comme l'enzyme utilisée mais qui n'aura pas d'action (et donc aucune activité car elle et incapable d'hydrolyser le substrat).  [...] Merci. J'ai vérifié et on utilise bien la BSA comme témoin car elle n'a pas d'activité enzymatique, cela nous permet donc de vérifier que l'activité mesurée est bien du à l'ajout de l'enzyme et non à l'ajout de protéines.  [...]

enzyme et fonctions???

Et de même pour son activité, oui une enzyme peut avoir deux activités mais elle n'aura que celles-ci qui ne vond pas se faire de manière aléatoir. une réaction pour un substrat, elle ne va pas une fois hydrolyser une protéine, et une autre fois phosphoryler une même protéine dans les mêmes conditions.  [...] Et aussi, il faut voir aussi l'activité enzymatique de la protéine par rapport aux substrats, par exemple je me souviens en spé de SVT, sur la chaîne de retraitement du Rubp, une protéine intervenait en utilisant de l'O2. Du CO2 pouvait prendre la place de l'O2 mais l'efficacité de la protéine se retrouvait fortement diminuée.  [...]

[Biochimie] retard sur gel

Bonjour, je travaille sur une protéine qui régule la transposition simple brin des séquences d'insertion IS200/IS605. in vivo, l'effet est bien visible mais in vitro, j'ai essayer de voir l'interaction de cette protéine avec des oligo simple brin marqué au P32 (extrémité droite, extrémité gauche, cible) et je n'ai pas d'interaction( pas de liaison de ma protéine sur ces oligo).  [...] test de clivage sur substrat double/simple brin, test de binding substrat double/simple brin (gel retard, dot blot) et je pense que l'effet de cette proteine n'est pas directe ou elle n'est pas active. j'ai essayer sur des extraits proteique nada pareil pas de retard.  [...]

[Biochimie] Malate dehydrogenase

dans le cadre d'un TP de biochimie j'ai eu l'occasion d'étudier l'activation thermique de la malate dehydrogenase (EC 1.1.1.37). Cependant, les resultats experimentaux paraissent totalement incohèrents, en effet a 70°C l'enzyme n'est toujours pas denaturée, son activité continue même d'augmenter.  [...] je n'exclue pas une erreur de manipulation même si je ne vois pas bien où, mais est-il possible que il y ai un effet protecteur du substrat potentialisateur sur l'activité de l'enzyme et jusqu'a quel point.  [...]

Electrophorèse sds-page de la MMP2

Après avoir fait une transfection ce cellules, j'ai récupéré des surnageants contenant mes protéines proMMP2 et deltaproMMP2. J'ai analysé mes protéines sur un zymogramme contenant de la gélatine (substrat préférentielles de mes protéases) et j'ai pu observer leur activité grâce à des spots de digestion sur mon gel coloré au bleu de Coomassie.  [...] D'autre part j'ai fait une électrophorèse sur gel SDS-PAGE sans gélatine coloré également au bleu de Coomassie, mais cette fois ci je n'ai observée aucune bande de migration. Je ne parviens pas à expliquer pourquoi je n'ai pas pu observer le migration de mes protéines.  [...]

[Biochimie] Expérience!!!!!

Quel expérience pouriez vous faire pour montrer que les enzymes sont détruite par une température de plus de 50°C.   [...] tu mesure son activite pour son substrat a sa temperature optimal. puis tu chauffe a 50°C et tu l'as remet a sa temperature et tu mesure son activite avec son substrat. si l'enzyme est detruite alors il n'yaura une faible activite et si ce n'est pas le cas, elle aura une activite normal.  [...]

[Divers] Comment déterminer l'activité d'une kinase en pratique.?

D'aprés ce ke j'ai lu on peut utiliser in-vitro. la kinase, de l'ATP marqué, Mg2+ je crois, et la proteine substrat (ou juste un peptide synthétique commercial recouvrant le site de phosphorylation.  [...] Sinon si tu connais le nombre de molécules de substrat mis dans le tube en presence de kinase, que tu connais la quantité de kinase mise et que l'ATP radioactif n'est pas limitant, alors en déterminant la quantité de radioactivité incorporée dans les proteines tu dois pouvoir en deduire une activité spécifique.  [...]

Liaisons H et ponts disulfure.

Les liaisons H interviennent un peu partout, autant dans le repliement de la protéine, que dans la reconnaissance du substrat (site de liaison) et le mécanisme réactionnel de catalyse (site catalytique), ces liaisons étant très fréquentes.  [...] Les ponts disulfures servent plutot à stabiliser une protéine, et je ne pense pas qu'elle servent à lier enzyme et substrat.  [...]