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[Biochimie] Enzymologie principe du test d'activité

L'étude de l'activité d'une enzyme dépend de l'enzyme étudiée. Tu n'étudieras pas l'activité d'une protéase de la même manière qu'une nucléase ou une enyme d'une voie métabolique.  [...] Pour étudier l'activité d'une protéine tyrosine kinase, tu peux suivre la phosphorylation d'une protéine (qui est sensée être son substrat) en regardant l'incorporation de 32 P en utilisant du [³- 32 P]ATP.  [...]

[Divers] Comment déterminer l'activité d'une kinase en pratique.?

D'aprés ce ke j'ai lu on peut utiliser in-vitro. la kinase, de l'ATP marqué, Mg2+ je crois, et la proteine substrat (ou juste un peptide synthétique commercial recouvrant le site de phosphorylation.  [...] Sinon si tu connais le nombre de molécules de substrat mis dans le tube en presence de kinase, que tu connais la quantité de kinase mise et que l'ATP radioactif n'est pas limitant, alors en déterminant la quantité de radioactivité incorporée dans les proteines tu dois pouvoir en deduire une activité spécifique.  [...]

[Biologie Cellulaire] Activation du MPF

on ne mesure pas a proprement dit l'activité h1 kinase. c'est le test qui s'appelle comme ca. la technique te permet de voir s'il y a eut transfert d'un phosphate marqué ici ATPgama P32 a un receveur ici Histone H1. si oui alors la molecule que tu as testé cdc2/cdk1 par exemple a assuré le transfert du phosphate et a donc eu une activité kinase ( il a phosphorilé l'histone).  [...] l'ATP en association avec l'histone 1 est un substrat du MPF donc il suffit de coupler ce substrat avec un élément radioactif (32P) et de suivre son activité.  [...]

[Biochimie] activité enzymatique specifique

Et bien je veux d'abord comprendre comment on calcule l'activité enzymatique et l'activité spécifique à l'aide de µ (Coefficient d'extinction moléculaire).  [...] L'activité enzymatique (1UI = quantité d'enzymes transformant une micromole de substrat par minute) peut être exprimée par ml de solution enzymatique ou rapportée à la masse de protéine enzymatique et on parle alors d'activité spécifique.  [...]

[Biologie Cellulaire] poly-ADP-ribosylation de protéines

Je ne suis pas spécialiste mais peut-être que, comme pour les phosphorylations, cette modification post-traductionnelle peut être mise en évidence par un marquage métabolique. Le co-substrat des PARPs est l'ATP. Il est peut-être possible de mettre en évidence la poly-ADP ribosylation de ta protéine purifiée en présence d'une PARP recombinante et d'ATP alpha 32P par autoradiographie.  [...] Merci pour ta réponse. C'est sans doute une bonne idée mais notre labo n'est pas habilité pour la manipulation de radioactivité. Est ce qu'en inhibant les PARP, je peux induire un changement de poids moléculaire de ma protéine Ce serait déjà une indication.  [...]

rapports entre structure et fonction

à l'échelle des protéines là tu peux parler des structures primaires (enchaînement d'acides aminés), secondaires, tertiaires et quaternaires que peut prendre une protéine (activation d'une protéine qui devient fonctionelle).  [...] autre cas. une enzyme est un protéine et elle est soumise à des phénomènes d'allostérie et de coopéritivité (régulation de l'activité enzymatique), site actif, relation enzyme-substrat etc.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle de la glycolyse

Y a un truc qui me chifonne. la phospho fructo kinase utilise bien l'ATP comme substrat L'ATP n'est donc pas un inhibiteur lorsque celui ci se fixe sur le site actif, non.  [...] Bien sur que l'ATP est un substrat. les cofacteurs ne sont pas indispensable à l'enzyme ils ne font qu'augmenter son activité.  [...]

[Biochimie] Extraction proteines de champignon

bonjour les amis, voilà je suis mycologiste et j'ai jamais eu à faire une extraction de protéines avec une électrophorèse, j'ai beaucoup lu concernant les protocoles d'extraction, je souhaiterais cependant avoir un avis pratique de la part de ceux qui ont plus d'expérience sur la paillasse. merci.  [...] ben... tout dépend de ta protéine, recombinante ou pas, substrat potentiel d'une enzyme, son pHi, sa concentration, son activité enzymatique propre... et ca dépend aussi de ton champignon de départ. il y des dizaines de protocoles complètement différents selon tous ces paramètres.  [...]

enrichissement de fractions

A mesure que l'on purifie, la concentration du produit d'intérêt devrait augmenter. En enzymologie, une méthode pour suivre cela est de suivre l'activité enzymatique (en gros la quantité de substrat consommé [ou de réactif formé]/unité de temps/quantité de protéine [ou volume]).  [...] En général, on dose les protéines et on fait une réaction enzymatique. On a donc le volume, la quantité de protéine et l'activité enzymatique (Unité enzymatique).  [...]

[Biochimie] enzymes et substrat biolux

la GFP c'est encore autre chose. Elle n'a pas d'activité enzymatique contrairement a la ßgal ou luciferase. C'est simplement une protéine fluorescente, c'est à dire qu'elle émet des photons lorsqu'on l'excite a une longueur d'onde particulière. Elle n'utilise pas de substrat au sens chimique.  [...] Il m'est arrivé de mesurer l'activité beta-galactosidase avec un luminomètre. Dans ce cas là, le substrat employé ne doit pas être du X-Gal comme il est coutume d'employer pour des tests de sous-clonage, mais un substrat luminescent.  [...]