• Forum - Activité, Enzymes, échantillon

[biochimie] activité spécifique d'un enzyme selon la concentration

On rapporte l'activité d'une enzyme spécifique sur une quantité d'enzymes totale. Ca veut dire que tu as d'autres protéines dans ton échantillon qui ne participent pas à l'activité dont tu mesures car elles ont une autre action, agissent sur un autre substrat etc..).  [...] Si tu as 50% de l'activité spécifique tu as donc 50% des enzymes qui t'intéresse dans l'échantillon et 50% d'enzymes que tu aimerais t'en débarassser. Le but étant par exemple de mesurer l'indice de purification d'une technique ou tout simplement vérifier qu'on a un échantillon de protéines qui est le plus pur possible pour divers manipulations,études.  [...]

[Biochimie] dosage enzyme pour quoi utiliser le bain-marie ?

Je pense que pour la préparation du tissu dans le tampon, on dit qu'il faut travailler dans la glace 4C°,c'est pour inactiver l'enzyme(par le froid) et éviter l'augmentation de la température du tissu lors du broyage et de ce fait éviter la dénaturation de l'enzyme, car une enzyme soumise a basse température est inactivé mais elle n'est pas dénaturée (et qui est donc de ce fait détruite comme dans le cas d'une haute température).  [...] Soit on veut empêcher que l'enzyme soit active durant la phase de préparation (car ainsi il n'y a aucun produit de formé, toute l'activité que tu verras par augmentation de l'absorbance sera du à des réaction se produisant à ce moment là), soit il y a d'autres enzymes ou inhibiteurs de ton enzyme dans l'échantillon qui pourrait dégrader ton enzyme d'intérêt.  [...]

[Biochimie] calcul d'activité de différents marqueurs cellulaire

Connaissant le volume de l'échantillon dont vous mesurez la DO, vous pouvez en déduite la quantité molaire de DPIP consommée en 1 minute, ce qui correspond à l'activité de votre échantillon.  [...] edit. D'après ce que je comprends on te demande l'activité dans la fraction de 1 mL, pas dans les 10 µL de l'échantillon, si j'ai mal compris il faut bien sûr tenir compte de la dilution de l'échantillon. Si je ne me suis pas trompé sur l'interprétation, c'est l'activité spécifique qui va tenir compte de la dilution (en ramenant l'activité à la quantité d'enzyme, et donc au volume de l'échantillon ajouté à ta fraction de 1 mL).  [...]

[Biochimie] Activité enzymatique

La précipitation au sulfate d'ammunium permet la concentration de l'activité enzymatique.Cependant, si on passe d'un volumé de filtrat de culture de 50 ml à un précipité de 5ml, on concentre 10 fois notre échantillon. Normalement on doit obtenir une activité enzymatique multiplié par 10 ( en théorie).  [...] L'activité enzymatique n'est pas une quantité. L'activité enzymatique est donnée par une enzyme. Ce que vous faites varier c'est la concentration de l'enzyme.  [...]

[Biochimie] facteur de purif et rendement

Je vois bien la différence entre les 2 mais pdt le TP que nous avons fait, on essaye de purifier une enzyme... bon alors jusque là tout va bien. Je suis d'accord sur la définition que tu donnes du rendement et du facteur de purif, aussi sur le calcul à effectuer.  [...] L'activité totale de l'enzyme est mesurée dans la totalité de l'échantillon afin de savoir quelle quantité d'enzyme fonctionnelle on a avant et après la purif.  [...]

[Biochimie] Biochimie > Enzymologie > constante de Michaelis (Km)

Je m'explique, lorsque tu fais une experience avec une enzyme et son inhibiteur, les contantes que tu parviens a obtenir ne sont pas les vraies constantes de l'Enzyme, vu que celle-ci est inhibee, ce ne sont que les constantes apparentes.  [...] B- Sachant que le dosage de protéine donne un résultat de 2,8 mg/ml pour l'échantillo, enzymatique, calculez l'activite spécifique de l'échantillon ( j'ai trouvé 23,92 UE mg-1).  [...]

[Immunologie] immunoblote

bonsoir, si c possible de m'expliquer le principe d'immunoblote je c que c une électrophorèse qui a un rapport avec un anticorps mais j'ai pas bien compris merci.   [...] Tu dépose l'échantillon protéique sur SDS-PAGE après migration tu fait agir l'anticorps dirigé spécifiquement contre la proteine que tu veux détecter. Cette anticorps est couplé à une enzyme ou un fluorochrome comme sa après lavage si tu detectes l'activité enzymatique ou la fluorescence sa veux dire que l'anticorps est présent est donc que le protéine est présente.  [...]

Calcule d'activité spécifique à partir absorbance

Voila j'aimerais savoir comment calculer une activité spécifique de mon enzyme (trypsine) à partir d'une absorbance à 280 nm (fixé pour savoir quantité de protéines dans échantillons) et à 410 nm (la pente del a mesure de l'hydrolyse de mon subtrat par mon échantillon de trypsine en fonction du temps).  [...] Je vois que pour passer de l'activité de mon enzyme à l'activité spécifique je n'aurais car divisé par la valeur correspondant à A280 en mg/ml ou calculer la concentration avec la loi de beer-lambert. Ce que je capte pas c'est comment avoir l'activité enzymatique à partir de l'absorbance à 410nm car l'unité c'est en A/s donc une vitesse et quand je regarde sur internet ca s'exprime en mmol/min ou nkat/s.  [...]

Révélation enzyme au ROUGE CONGO

Après avoir effectué une électrophorèse en condition native avec comme échantillon des enzymes (sur gel en polyacrylamide), j'ai effectué une révélation de ces dernières au Rouge Congo.  [...] Enfaite on utilise le rouge congo pour colorer le substrat qu'utilise notre enzyme. Là où il n'y a pas de coloration c'est l'endroit où l'enzyme a travaillé et a dégradé le substrat.  [...]

[Microbiologie] Viabilité d'une bactérie et ARN

Avant de te donner une liste, faudrait que je recherche mes tests. Mais je sais que celle qui est(etait) vendue par Pharmacia,avait une telle activité reverse transcriptase, que je n'avais meme pas besoin de l'enzyme RT pour amplifier mes ARN.  [...] Ce que tu proposes (enlever l'enzyme RT), ne resoud pas le problème si ta Taq-polymerase possede une activité reverse transcriptase, dans tes témoins tu auras toujours une ampli...tu en conclueras que ton echantillon est contaminé par de l'ADN, alors qu'en réalité il n'en n'est rien.  [...]