• Forum - Acétone, Solution, ARN

[Biochimie] L'acétone à froid dans l'extraction de l'ARN

Oui effectivement je confirme que l'utilisation de l'acétone est fait pour la précipitation des protéines, c'est vraie qu'on utilise généralement l'éthanol pour la précipitation des protéines, maintenant la précipitation à l'acétone est aussi plus efficace car, contrairement à l'éthanol, très peu de protéines sont solubles dans l'acétone.  [...] Si mes souvenirs sont bons, une fois qu'on a une interface claire après les lavages au phénol, on met de l'acétone avec notre solution d'ARN, on la laisse au froid toute la nuit puis on centrifuge longtemps à forte vitesse pour précipiter l'ARN. On obtient alors un culot qui ne contient que l'ARN q'on sèche alors par 1 ou 2 lavages à l'éthanol.  [...]

[Biologie végétale] extraction de lipides chlorelles prépa BCPST

Je doute que la quantité de lipide en tant que telle en général diffère d'une condition à l'autre. C'est surtout la vitesse de croissance et donc la masse sèche qui a une chance de varier. La variation de la quantité de lipide ne sera qu'une conséquence de cela.   [...] Après avoir trouvé dans des publis américaines quelles sortes de lipides sont présentes dans les chlorelles, je me propose de non pas quantifier mais les caractériser qualitativement, en mesurant les indices d'acidité, de saponification et d'iode II. Ainsi on verrait si certains paramètres du milieu engendrent une production de lipides de meilleure qualité pour faire du biocarburant, et peut-être que l'on pourrait réaliser les expériences correspondantes directement avec la solution de chlorelles.  [...]

[Biochimie] extraction ADN et ARN

je souhaiterais avoir quelques renseignements au sujet de différentes solutions utilisées pour l'extraction de l'ADN et de l'ARN.  [...] L'acétone et TCA (l'acide trichloroacétique) sont utilisés pour la préciptation des protéines pour l'extraction de l'ARN.  [...]

comment préparer une solution 0,24% p/v d'éthanol?

J'ai un lab où on me demande de préparer une solution contenant 0.24% p/v d'éthanol et 0.12% p/v d'acétone. Puis à partir de cette solution,préparer une dizaine de dilutions pour couvrir uniformément l'intervalle entre 30% et 300% de la limite légale en éthanol qui au Canada est de 0.08% (0,8mg/ml).  [...] pour les dilutions je sais que ma concentration la plus élevée sera de 2.4mg/ml (300%) et la moins concentrée sera 0.24mg/ml (30%) mais je ne sais pas comment faire pour calculer le volume à prélever à chaque fois pour préparer les autres dilutions.   [...]

TP extraction des pigments végétaux : besoin d'aide !

Lors de la purification, comment verifie-t-on que la dernière solution de lavage ne contient plus d'acétone.  [...] N'ayant pas utilisé le même mode opératoire que toi (pour ma part. séparation de pigments végétaux sur micro-colonne chromatographique), je dirais sans certitudes que l'acétone permet de ne pas retenir l'eau dans les fibres du papier filtre, vu que l'eau est néfaste pour la qualitée d'une chromatographie.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème avec gel d'acrylamide avec urée

J'ai quelques problèmes avec un manip de purification de protéines sur chromatogaphie d'affinité et j'aurais voulu avoir votre avis.   [...] L'expérience que je fais est la fixation d'ARN sur des billes de streptavidin-agarose. J'incube les billes avec des extraits nucléaires, je lave et j'élue les protéines avec un mélange d'acide acétique glacial 66% et 33mM MgCl2. Je précipite ensuite les protéines dans l'acétone (5 volumes) en présence de glycogène.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

J'utilise le kit RNeasy Mini. Il est prévu pour extraire les ARNs à la base mais on peut aussi récupérer les protéines dans le tampon RTL. Il suffit juste de faire une précipitation à l'acétone.  [...] Concernant la précipitation tu as raison, c'est hyper dur à redissoudre. Je le fais dans du tampon 2D (saturé en urée, thiourée + CHAPS et SDS) et j'incube mes échantillons 1 nuit à 4°C (pas de congélation). Ca facilite la dissolution (le culot devient translucide, un peu gélatineux).  [...]

[Biochimie] svp je veux la correction de ce tp

Précipiter les protéines par addition d'acétone glacée (3 vol d'acétone pour 2 vol d'extrait). Agiter 2 minutes et laisser 1 h à 4°C.  [...] Enfin, les membres de ce forum ne sont pas à ton service, tu n'as aucun droit d'exiger qu'ils te trouvent la correction d'un TP sans aucune gratitude à leur égard, et en plus en exigeant leur rapidité.   [...]

[Biochimie] Précipitation des protéines.

Il y a une étape ou j'aimerais bien précipiter un maximum de protéines présentes dans ma solution seulement je ne sait pas trop quelle méthode employer (je pencherais plutôt pour un solvant organique, mais lequel). les protéines récupérée me serviront à faire une électrophorèse.  [...] Oui ça marche très bien. précipitation dans 4 à 5 volumes d'acétone (minimum 20 min à -20°C), centrifugation pour récupérer les protéines (15000g pendant 10 min) + 2 ou 3 lavages.  [...]

Séparation des pigments végétaux par partage entre solvants

Pourquoi les pigments éliminés en premier par l'acétone puis par le méthanol sont les plus apolaires c'est-à-dire les xanthophylles et les caroténoïdes Dans la dernière phase (=éther de pétrole) restent les chlorophylles. Pourquoi Les chlorophylles devraient être éluées en premier puisqu'elles sont les plus polaires.  [...] Il ne s'agit pas d'une chromato de partage. En fait j'ai un mélange de solvants dans de l'éther de pétrole. Je le place dans une ampoule à décanter. Puis j'ajoute successivement de l'eau, de l'acétone. J'élimine la phase inférieure contenant les xanthophylles.  [...]