• Forum - Acétate de sodium, éthanol, Volume, Tampon

[Biologie Moléculaire] PCR temps réel

une purification à l'acétate de sodium/ethanol devrait faire l'affaire ensuite tu resuspends dans le volume approprié en eau distillé ou en tampon TE au choix.  [...] Si tu as peur d'utiliser acetate de sodium/ethanol tu peux toujours utiliser un kit de purification PCR (plus cher), dans ces kits il y a bien souvent deux types de réactifs, les réactifs pour purification sur gel et les solution pour une purification en tube pcr sans passer par gel, ces kits utilisent des membranes sur colonnes que tu élue au final avec l'éluant de ton choix.  [...]

demande d'infos!!! extraction de l'ADN

Quand tu as ta sauce d'ADN, tu utilises un alcool (style éthanol) pour précipiter ton ADN (car l'éthanol est hydrophobe). Tu utilises ensuite des ions chargés positivement (NH3+,...) pour rapprocher les différentes molécules d'ADN (qui sont chargée - à cause de leurs phosphates) et ça permet le regroupement des ADN entre eux, ceux qui les rend visibles.  [...] En bref, il faut precipiter l'ADN avec de l'Acetate de Sodium et de l'Ethanol 70% par agitation puis centrifugation. Il faut eliminer tout l'ethanol puis nettoyer le culot avec de l'Ethanol 100%. Apres une nouvelle centrifugation, l'Ethanol est eliminé et le culot d'ADN seché puis remis en suspension dans un tampon.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Pour résumer. détruire les cellules (qui ont été lavées dans un tampon) à l'aide d'un détergeant (SDS trouvable dans le commerce), faire une première centrifugation courte pour faire descendre tout les débris cellulaires, prélever le surnageant (où il y a l'ADN et des protéines), puis faire précipiter l'ADN à l'aide d'Ethanol et d'acetate de sodium.  [...] Pour l'éthanol, au labo, on en a deux sortes. L'éthanol 100% classique (en fait 99%), que l'on utilise pour les tampons etc... Et l'éthanol ultra pure (99,999% certifié) pour les manips les plus précieuses (précipitation de l'ADN par exemple). Et je confirme que le méthanol est de moins en moins utilisé, à cause des coups de son élimination (toxique, donc pas dans l'évier.).  [...]

[Microbiologie] tampon phosphate

Pour une solution tampon à pH 5 je te conseil plutôt un tampon acetate (mélange d'acide acitique et d'acetate de sodium) avec la même logique de mélanger les deux au pHmètre.  [...] Et il suffit d'une minute de google pour soit trouver un protocole pour préparer un tampon, soit pour se rendre compte que ça n'est pas une bonne idée. Au moins je l'aurais mis sur la voie.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN

protocole Trizol marche bien en veg, sinon CTAB pour les récalcitrantes (genre riches en phenols) et si malgré ca tes ratios sont toujours mauvais, après l'extraction passe par une purification phenol-chloroforme et précipitation a l'ethanol.  [...] sinon faire un mélange avec methanol-chloroforme (récupérer la phase supérieur) suivi d'un mélange chloroforme (récuperer la phase supérieur) suivi d'une précipitation à l'acetate de sodium et ethanol (0.3M finaux d'acetate de Na, avec 2.5V de ethanol 99%, une heure a -20°, centrifuger récupérer le culot et le laver avec 250 microlitres ethanol 70%, centrifuger evacuer l'ethanol et resuspendre en eau-DEPC ) permet normalement d'avoir une bonne qualité d'ARN sans trop de pertes.  [...]

[Biotechnologie] Extraction et purification ADN végétal

Ensuite beaucoup plus loin dans la manip j'ai utilisé un tampon Murray-Thompson (éthanol absolu + acétate d'amonium + eau).  [...] De plus, ma manipulation n'a rien donné, après le passage au spectro (230 à 320 nm) le résultat est plus que négatif (apparement trop de phénol) et un gel d'électrophorèse ne m'a rien donné non plus.   [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction adn phénol/chloroforme

a quoi servent le Xgal, le bromure d'ethidium, le phénol, le chloroforme,l'acétate de sodium et l'éthanol dans le clonage moléculaire.  [...] Est ce que le problème pourrait venir du fait que je stocke mes tissus dans de l'éthanol absolu un certain temps (ça se compte en semaine).  [...]

Besoin d'un protocole

auxquels sont ajoutés 50 µl d'acétate de sodium 3M et 500 µl d'éthanol 100 %. Après.  [...] Juste pour tenir informés que en fait, le CTAB protocole est bien adapté pour extraire l'ADN végétal (ici des frênes) mais que pour du matériel mort, il faut juste laisser une longue phase isopropanol. En fait au lieu de tout de suite centrifuguer l'isopropanol.   [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de lyse extraction ADNg

Ensuite le volume à ajouter sur tes cellules est variable suivant le nombre de cellules, pour un nombre de cellules. 3.10^7 ajoute 0,3 ml de tampn de lyse et 1 ml si tu effectue ton extraction sur plus de cellules. Il te suffit ensuite d'incuber tes échantillon 12 à 18h à 50°C sous agitation dans des tubes bien fermés.  [...] Après tu ajoute 1volume équivalent (0,3 ou 1 ml suivant le nombre des cellules) de phenol/chloroform/alcool isoamylique. Centrifuge 10 min à 1700g. Après tu transfert la phase aqueuse dans un nouveau tube et tu ajoutes 1/2 volume d'acétate d'ammonium 7,5M et 2 volume d'éthanol 100%, l'ADN devrait précipité immédiatement.  [...]

Precipitation adn plasmidique

J'ai dejà essayer avec de l'ethanol absolu et acetate de sodium mais j'ai laissé precipiter 1h à temperature ambiante or j'entend des gens dire que le mieux serait de le laisser toute une nuit à -80°C.  [...] Autre solution tu rajoute a ta culture sur la nuit un peu de chloramphenicol pendant quelques heures. Ca bloque la multiplication des bacteries mais n'affecte pas pas la replication de l'ADN. donc tu augmente la quantité de plasmide dans tes bacteries.   [...]