• Dossiers - Molécules, Activité, Enzyme

Conclusion | Dossier

Ensuite, nous avons cherché à voir si d'autres composés donnés comme inhibiteurs de la Rho-kinase (la HA-1077 et le Y-32885) pouvaient avoir une action sur l'activité de la protéine kinase C. Il s'est avéré que les molécules possèdent une activité antioxydante due à une inhibition de l'enzyme étudiée.  [...] Les modèles habituellement publiés utilisent des conditions et types cellulaires ne prenant pas en compte la réalité physiologique de la cellule. Nous avons donc défini le choix cellulaire, les conditions d'activation et les éléments indispensables pour reproduire le plus fidèlement possible le milieu biologique de départ, afin d'étudier l'influence des molécules originales sur l'activité enzymatique de chacune des isoformes de la cyclooxygénase.  [...]

Contre le Sida, des trithérapies antirétrovirales contraignantes | Dossier

Les premières molécules développées bloquent l'activité d'une des enzymes essentielles au VIH. la transcriptase inverse. La zidovudine, comme certains de ses successeurs, joue le rôle d'un inhibiteur nucléosidique (INTI). Ces précurseurs de nucléotides, activés par phosphorylation, vont intégrer le brin d' ADN viral que synthétise l'enzyme, transformant ainsi le génome du VIH, ce qui l'empêche de se répliquer normalement dans les cellules infectées.  [...] La génération suivante de médicaments a remplacé ces nucléosides par des analogues de nucléotides, ne nécessitant pas l'activation préalable. Eux aussi s'intègrent dans le brin d'ADN viral synthétisé et ont le même effet. Enfin, la troisième génération s'est attachée à créer des inhibiteurs non nucléosidiques (INNTI), des molécules qui inhibent l'activité enzymatique en se fixant sur un site allostérique, ou régulateur.  [...]

Résultats | Dossier

Pour la suite des manipulations, à savoir l'étude de liaison et la mesure de l'activité enzymatique, il est nécessaire de travailler sur une enzyme purifiée. Ceci a été effectué par chromatographie échangeuse d' ions sur une colonne DEAE-Sephacel.  [...] Afin de confirmer l'action inhibitrice du CED-28 sur la protéine kinase C et une absence d'activité des trois autres molécules sur l'enzyme, nous avons cherché à voir quelle influence pouvait avoir ces composés sur la tanslocation de la PKC du cytoplasme vers la membrane plasmique.  [...]

Schémas d'activation de la protéine Kinase C | Dossier

Elle est capable de fixer la [PKC ] lorsque celle-ci est sous sa forme activée mais ne peut pas fixer cette enzyme sous sa configuration inactive. RACK sert uniquement à stabiliser la [protéine kinase C ] et par là même à augmenter son activité enzymatique (Csukai M. et al., 1997).  [...] Lors d'une activation prolongée de cellules par les esters de phorbol, il a été constaté que la [PKC ] perdait son activité aussi bien au niveau cytoplasmique qu'au niveau membranaire. Ceci montre que cette enzyme subit une régulation négative. Deux mécanismes la régissent.  [...]

Discussion | Dossier

La suite de l'expérimentation consiste en l'étude de liaison avec le phorbol-12, 13-dibutyrate, ceci devrait permettre de vérifier nos premières conclusions sur le potentiel inhibiteur des composés originaux. Comme nous pouvions nous y attendre, les molécules CED-32, CED-33 et CED-39 n'ont pratiquement aucun effet sur la liaison entre l'ester de phorbol et la protéine kinase C (le CED-28 serait capable d'inhiber la PKC tandis que les trois autres seraient inactifs sur cette enzyme.  [...] Le fait que la translocation de la protéine kinase C ne soit pas affectée par les trois autres molécules confirme dans ce cas que le CED-32, le CED-33 et le CED-39 ne sont pas des inhibiteurs de la protéine kinase C. Ces résultats nous permettent d'élargir notre analyse car nous avons pu mettre en évidence que lors d'une activation par le fMLP, nous avons une inhibition de la translocation de la protéine kinase C alors que ces composés ne sont capables d'interagir avec l'enzyme elle-même.  [...]

Etude de la réaction inflammatoire, Partie 1 | Dossier

Nous avons mis au point un modèle permettant d' étudier des molécules potentiellement inhibitrices de cette enzyme dans le cas d'une flambée respiratoire chez le granulocyte neutrophile humain. Nous sommes capables d'étudier un effet au niveau cellulaire, de rendre compte de la capacité de ces molécules à inhiber la reconnaissance entre la protéine kinase C et un composé spécifique, et enfin de voir leurs influences sur une particularité de cette enzyme.  [...] Notre but a été de mettre au point un modèle permettant d'étudier des molécules inhibitrices spécifiques de la cyclooxygénase -2 versus cyclooxygénase -1. Il a fallu choisir les cellules et les conditions d'activation pour visualiser de façon différentielle l'activité de l'une et l'autre des isoenzymes afin d'avoir un modèle cohérent et qui tient compte au maximum des propriétés biologiques de chacune des isoformes.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

La lactate déshydrogénase est une enzyme exclusivement cytoplasmique et relativement stable. L'augmentation de l'activité de cette enzyme dans le surnageant des cellules permet de détecter une altération de la perméabilité membranaire.  [...] La cytotoxicité de la molécule à tester est évaluée par le dosage de l'activité enzymatique de la lactate déshydrogénase (LDH) du surnageant cellulaire d'une suspension de granulocytes neutrophiles (5.10 6 GrN/ml) incubée à 37°C avec l'inhibiteur à différentes concentrations.  [...]

Immunologie : le rôle de la PI3-kinase | Dossier

La PI3-kinase (son nom complet est phosphoinositide-3-kinase) est une enzyme dont l'activité est quasi-nulle dans les LT avant la reconnaissance de l' antigène. Lorsque cette reconnaissance survient, l'accumulation de phosphotyrosines entraîne alors son recrutement dans la synapse immunologique au contact de son substrat principal, un phospholipide membranaire particulier appellé PIP 2 (phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate).  [...] Nous avons été les premiers à montrer ce phénomène dans des LT vivants en utilisant des techniques d'imagerie de fluorescence. L'astuce expérimentale consista à fusionner par génie génétique le domaine PH d'une de ces protéines, la protéine Akt (une enzyme à activité sérine/thréonine kinase ), à une protéine fluorescente, la GFP ( pour green fluorescent protein ), issue d'une méduse ( Aequorea victoria ).  [...]

Le traitement de la grippe aviaire et des virus influenza | Dossier

La réplication s'arrête. La conception de ces molécules est devenue possible avec la connaissance de la localisation précise et de la structure 3D du site catalytique de l' enzyme. La cristallographie a montré la conservation du site actif de l'enzyme et de sa séquence d'acides aminés dans les différents sous-types de la NA (Oxford, Bossuyt et al. 2003 74).  [...] Les composés dimères du zanamivir, conjugués à des molécules de 14 à 18 atomes au niveau du groupe hydroxyle en position C7, ont une activité antivirale jusqu'à 100 fois supérieure à celle du zanamivir in vitro et in vivo chez le rat, avec pour une dose unique, un maintien de taux thérapeutiques efficaces, de l'ordre d'une semaine, au niveau des tissus pulmonaires (Macdonald, Watson et al.  [...]

Généralités sur la protéine Kinase C | Dossier

C'est sur ce domaine que viennent se fixer les activateurs, le calcium et les cofacteurs. Cette partie de la protéine est également impliquée dans les phénomènes de reconnaissances et de liaisons protéine-protéine, l'ensemble de ces éléments permettant de contrôler l'activité et la localisation de l'enzyme dans la cellule.  [...] cette modification ne semblerait pas influencer l'activité enzymatique. Cette isoforme est également ubiquitaire, mais elle est trouvée en plus grande quantité dans les cellules nerveuses.  [...]